间充质细胞干细胞贴壁情况

蜗牛爱贝贝

现在我在培养脐带间充质细胞细胞组织块贴壁时，采用每5天换一次液，但到15天时，细胞还是很少贴壁，我想问一下，现在大家在做组织块培养贴壁细胞时，换液间隔还有培养基用量情况（现在我是用T75瓶培养的，组织块和培养基每瓶一共10ml左右吧）

沙漠狐o0

培养基可以少加一点，每5天换一次液，期间尽量不要去动。正常情况14天可以传代了。

woshibotao_01

刚贴块完可以少加一些培养液，这样不至于把块冲掉，然后过4-5天换液一次，10天左右应该会有细胞爬出。
7 H" d4 [1 s9 w6 o培养液的量可根据细胞爬出生长情况做相应的微调。尽量做到最大程度满足细胞生长代谢所需要营养为准。

月_幻影

我们是铺瓶后先倒置培养、然后补加培养液正置培养；原代培养的前7天不要随便移动静置培养，第七天换液后每间隔两天换液一次，一般10~14就有细胞爬出了；一般75瓶加培养基15ml左右；换液时注意倒过瓶子来补加，防止将组织块吹起影响贴壁情况。

daviddow

3天换一次就可以。细胞培养10天就该很多的。这个细胞长得很快的

shamoye

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T75的瓶子怎么个倒置倒、正置法？

月_幻影

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倒置培养就是在你将组织块铺瓶后将瓶子翻过来底面朝上置于培养箱中培养一段时间，然后加入原代培养基再正置过来继续培养；如果直接正置培养，注意培养液不要一次性加太多，先加少量培养液（或者先不加），等过4~24h后再补加即可。总之原代不要立刻加培养基，不然组织块贴的不牢固又怎么能爬出细胞？！

yuanyecat

你用的是什么培养基和FBS，可能是这些方面有问题

caustic

1.组织块贴壁加入的培养基的量应根据组织块的量，原则上只需要将组织块稍稍侵润即可，不需要加入太多，培养基加入过多会导致组织块悬浮，致使细胞贴壁生长速度过慢。
, A" n+ S) X/ U& X+ Z2.建议用25ml的培养瓶培养组织块，这样加入培养基的量好控制。
4 y( P7 p6 N" b$ b9 b3 I; E3.建议换液频率4-5天换一次，可以选择半换液，及根据培养液的挥发损失量添加培养基；再则就是全换液，及将原瓶中的组织块和培养基倾倒入另一个新培养瓶中，再在分别在原瓶和新瓶中加入少量培养基。
+ n' ?& R5 D" q4 l& z0 e. D4.如果是半换液，25ml培养瓶中培养基的加入量一般2ml即可，如果是全换液，新瓶培养基加2ml，原瓶培养基加5ml。

caustic

1.组织块贴壁加入的培养基的量应根据组织块的量，原则上只需要将组织块稍稍侵润即可，不需要加入太多，培养基加入过多会导致组织块悬浮，致使细胞贴壁生长速度过慢。
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$ ^" d$ X& b+ Q( M# d3.建议换液频率4-5天换一次，可以选择半换液，及根据培养液的挥发损失量添加培养基；再则就是全换液，及将原瓶中的组织块和培养基倾倒入另一个新培养瓶中，再在分别在原瓶和新瓶中加入少量培养基。4 H- L3 ]% G1 U) w+ p
4.如果是半换液，25ml培养瓶中培养基的加入量一般2ml即可，如果是全换液，新瓶培养基加2ml，原瓶培养基加5ml。