关于脐带间充质细胞干细胞传代问题

蜗牛爱贝贝

我今天在看文献时，看到有人将间充质干细胞传到了10代，结果流式检测结果还是很好，可是为什么我的培养到7、8代时，细胞就开始老化了，现在想问问大家，最多都传到多少代了，效果怎么样啊

nailute1985

跟你的培养条件，培养环境有很大关系的。尤其是酶消，对细胞伤害很大，其次就是不同的msc生长状态也是不一样的。

hyg5481655

跟培养方法有关，比如贴块时的密度，第一次传代的时间，比较重要的还有你的血清质量，传代比例，接种密度等有关。接种密度不能太低，建议不低于5000 cells/cm2。再说传到10代以后也没有什么用了吧，体积变大，生长变缓，做实验不提倡。此外流式结果在P3代以后表型基本变化不大，您说的老化不是指表型吧？不同组织的MSC也不一样。

蜗牛爱贝贝

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对啊 体积变大，生长变缓 根据形态看，不是细胞已经看似慢慢老化了吗，7、8代时，我是没做过流式，不知道谁做过7、8代甚至以后的流式实验

hyg5481655

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除非特殊研究目的，觉得P6以后的细胞做实验没意义，我们这里传到P20了，长得很慢，细胞很大，当时是想研究研究细胞衰老的

蜗牛爱贝贝

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那你们培养到P20代细胞，除了表型上容易看到外，还做其他方面的检测了没有

hyg5481655

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9 Q2 p8 e3 Q) V' p- mβ半乳糖苷酶可以测衰老，衰老的细胞被染色

野猪

脐带养过P15代，增殖速度还好，就是细胞变得大小不一，流式检测正常。

nkcell

与培养基的成分，传代时间，接种密度，传代过程中对细胞的损伤程度都有关系

caustic

普遍原因：1.细胞接种密度过低，细胞扩增缓慢，老化。* w6 p: @5 \* J9 h6 s) x
                  2.传代培养过程中是否注意换液。
- V) ~9 I1 }8 C8 x                  3.生长条件是否稳定。
- F9 H; J8 u1 P  r还有一个容易被忽略掉的就是，传代时培养瓶是否更换，对于未更换的培养瓶应该用PBS涮洗几遍，然后再加包被液进行包被。4 x( g5 s# E3 B8 E* j8 y