脐带间充质干细胞难以消化

chrindy

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我是自己提的脐带MSC，可能不是很纯，想问一下大家都怎么避免内皮细胞混杂进去啊，我觉得刮也刮不太干净

ych123

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3 `9 Y4 u; m$ ]$ _5 k* d是的，我是自己提的，都没啥进展啊，，想问一下买回来得0.25%的胰酶必须得稀释吗，我没稀释，昨天传了一下，感觉贴壁的细胞好少啊

chrindy

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状态好的MSC很容易消化，用0.25%胰酶的话动作要快，不然很容易消化过头影响细胞活性，我看一般大家消化MSC都用0.05%或者0.125%的胰酶，我用0.05%胰酶消化个30秒左右也就差不多了

ych123

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哦，我养的原代的感觉很难消化下来，T25的用的0.25%的胰酶1ml，消化了2分钟的样子，不知道会不会过，而且每次第二代感觉状态不咋好

wuhuaguo88l

首先用PBS将细胞洗2-3次，目的是去除血清，避免中和胰酶的消化能力；其次，胰酶最好37度孵育几分钟，因为胰酶最大的酶活温度是37度；最后，要根据不同细胞使用相应浓度的胰酶，比较难消化的，可提高到0.25。

ych123

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8 I) q" N# U4 X  N/ D谢谢你的意见

ywx6302706008

间充质很好消化的呀，室温就可以轻而易举消化下来，是不是你在消化前没有用pbs洗两遍呢，去除玩培养基后最好pbs洗两遍