组织块法培养脂肪干细胞

OLGA2002

最近在做脂肪组织块培养间充质干细胞，但都不成功，参考了文献，还是不成功，PBS冲洗后，除去血液和结缔组织，剪碎，成小块，种于皿中，就是不长啊，是什么原因呢，好着急啊，恳请各位指点迷津！！！！！

沙漠狐o0

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说一下细节嘛。
7 b' q: W! a) D( L/ T$ V% T' ~你可以试一下少加点培养基，多放一段时间。

wf78365421

时间不够长，组织块培养需要时间

saier.HK

说下细节啊 大侠。消化了吗？怎么消化的？用什么培养基？分离之后多久换液的？

colins

我觉得可能是培养的时间不够吧，我之前做过自体脂肪干细胞，当时我们用胶原酶消化了很长时间的，又是摇动，又是加热的。我想说的是我们用酶消化法做起来都很麻烦，你确定你用的组织块培养是合适的方法吗？是否不组织洗好的，是否除血管了，而所带的油脂又是怎么处理的？实在不行还是用酶消化法做吧

飞飞飞

切小块，胰酶加I型胶元酶处理半小时 （37度）。离心取最下面的单细胞。

OLGA2002

我的细胞没有消化，直接组织块种于皿中，加少量培养液，得过个10天左右，细胞才爬出来。培养一段时间发现，细胞长到P1的时候很多都变了形状，细胞边缘展开了，不知道是什么原因呢，是分化了吗？而且长得很慢，请各位大侠指点啊！！！

OLGA2002

而且还有一个疑问，就是组织块培养的时候，大家都是什么时间传代呢，是组织块周围密度很的时候传代，还是整个瓶里细胞的密度达到一定量的时候再传啊，我发现脂肪干细胞组织块周围密度大的时候传代，总体数量就很少，细胞传代之后长得很慢，请指点迷津啊！！

飞飞飞

组织块剪的再小些，少加培养液。

小云龙

同意楼主的说法，组织尽量的剪小点，不行的话可以压上盖玻片，用酶消化控制不好对细胞的损伤也是挺大的