新手求救贴——关于角膜缘干细胞的培养

yingwei

本人是第一次养角膜缘干细胞，做了两次兔子的原代可是细胞迁出来好慢。我最近一次种的原代细胞快1个月了，之前因为细胞还没爬满整个皿所以我也不敢传代培养。最近一次传代在几天前，但是发现细胞很难消化下来，我之前养骨髓间充质干细胞都是0.25%胰酶消化大约3min就可以消化下来，现在想请教的问题是：: y  F# l* X4 |; o8 V: }' w
1. 原代的角膜缘干细胞组织块培养应该在什么时候进行传代？+ a* o* J3 z7 S
2. 细胞传代的消化方法？
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1 q) ~* {1 {. ]请大神赐教！！！！

daiying5200000

原代角膜缘干细胞培养一个月的话估计已经没有多少干细胞了，角膜里面干细胞本身就很少，如果用有血清的培养基进行培养的话干细胞很快就分化了。我们之前养角膜缘干细胞的话可以用组织消化的方法。建议将你的细胞做流式，看是否保持有原来的特性。

FreeCell

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) Z7 U  i; j+ `: f' j你参考的是哪篇文章？ 不应当消化，培养好角膜直接贴到兔子眼睛上修复

daiying5200000

你是要做移植是吧？那就不能消化了。没有理解你是怎么用来移植的，是将整块角膜取下培养后，再用这块角膜移植？如果是这样，角膜内皮细胞应该是全部脱落了，这样移植后是不会有细胞迁移的，角膜基质细胞不会正常生长，角膜混浊。如果做角膜移植修复，可以考虑下IPS的方法嘛，日本都快出人眼的商品了。这方面申请课题还很容易。