请教论坛里的各位老师，怎么用淋巴分离液法分离外周血单个核细胞

zjhzxp926

一份采集好的外周血的量有50到100的体积，我要用淋巴分离液分离的话，是要将整份外周血直接加入淋巴分离液，还是讲外周进行离心浓缩后再加分离液（这样分离液的用量少点）。

beyond2008

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( E3 K: s3 r: K! Y9 N6 z) g  D我们实验室用的是GE healthcare公司的feicoll.网上有很多的Feicoll 分离PBMC 的protocol. 先看看你用的是哪个公司的试剂，看看说明书再决定。

luckyliu

血过来后不用浓缩，直接可以用ficoll分离，具体操作是根据ficoll的说明书来的，protocol到网上找找都会有的，

chuanbaozang

一般不需要浓缩，有的人直接全血处理，有的人先离心去血浆，然后再用生理盐水稀释处理。
% U) ?( U$ D. u, G仁者见仁吧，看看试剂的说明书，自己找一下更适合你的方法吧

luoan

一般都是直接分离的，我们按分离液：外周血=1：2的比例操作，注意不要将液面冲破。也有人将血液稀释后再进行分离。

colins

我们实验室是先去血浆，然后加了生理盐水稀释，在加入到分离液上离心的，感觉效果还不错

fenlichong

, N) f( y! F; D% E+ g
5 X& R- s* G! |" n! \外周血是机采的还是人采的啊？一般都是将血液稀释后分离而不是浓缩，将血液进行稀释可降低血液黏稠度和红细胞的聚集，提高单个核细胞的收获量。机采和人采的稀释比例要看具体情况。还有不知为何你想少加分离液，可根据说明书和实践来选择最佳使用量来达到较好的分离效果，附件为网上搜集的Farnham Lab PBMC分离protocol，可参阅下。 PBMC_Farnham_protocol.pdf (41.02 KB)

2015-8-24 09:44 上传

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Sarge

建议使用Ficoll分离的时候，先离心去除血浆，然后按照和全血1:1比例添加生理盐水浑悬，然后采用密度梯度离心方法操作就可以，但是这只是正常抽取的人外周血操作方法，机采的没有做过。

edwardellen

我们实验室用过天津灏洋的淋巴细胞分离液，就是TBD的，效果还挺好的。  L- o+ N& t+ X
使用的时候，可以配合羟乙基淀粉550，先用淀粉去除血液中的红细胞，之后用淋巴细胞分离液进行分离。* w7 @; @4 U, _5 q3 f
灏洋的分离液有详细的说明书，还配图解。2 d$ G  Q6 R' F: H5 x
需要注意的就是血加到分离液时，保持接触液面的平稳，不要过分抖动，分层效果会比较好。, J5 `4 Z6 y" J
离心结束后，吸取白膜层的时候，不要向下吸分离液，宁可多吸上层的血清，如果吸多了分离液，要用大量的生理盐水破坏分离液的比重，不然细胞离心不下来的。