transwell 用THP-1做趋化实验 求助

cyperus

各位前辈
6 C/ r/ r* F* n$ t) R1 f6 j最近在使用corning的5微米孔Transwell做趋化实验。使用的趋化对象是THP-1，测试肿瘤细胞对THP-1的召唤能力。
: b% O# j9 v! s' X我是收集培养过肿瘤细胞的培养基来做实验的，但是做了3次了还是没有细胞穿过...
# f! C# r% Y, N% f试过用Matrigel包被和不包被的Transwell，两次均没有细胞透膜。3 f! c7 V0 p9 i
如果您做过类似的实验，请求给予指点。将不胜感激..8 t8 v; V! e5 L; S* N
3 {9 W4 _/ o  D0 |3 a

shaozi402

细胞直径有多大？5um的孔，细胞能否穿过？

cyperus

回复 shaozi402 的帖子0 p# O3 Q4 J- o& h! i9 C
* g+ _9 I# \( ?; Z4 b* q9 a
趋化实验时候，细胞会通过变形移动到趋化因子较高浓度的地方。正常的人体，细胞的趋化亦是如此。7 b% G' p' w& D7 C: d* t
使用transwell时候，THP-1会变形穿过小孔移动。5 Z1 {3 v, l' @
5um的孔径是适合THP-1穿孔的。详见conrning网页

tingting2113

实验过程应该没有问题，是不是细胞活力的问题呢？

cyperus

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% h+ j: B9 r5 F% Z5 {
$ [4 E5 @! p: b2 ]tingting2113，您好6 z- }, M" G6 @5 Y: O/ L
您之前做过类似的试验么?
% `0 B4 Q- \7 Q) D! C" o6 @细胞活性的话大约60%左右，但是在上室加细胞时候是按照活细胞数加样的。

tingting2113

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9 r3 Z8 i# A$ h  ]8 u& P  [3 G2 b2 l
我用Transwell做过细胞的侵袭实验，和你这个过程差不多，之前没有做活力测定，只是选取对数生长期的细胞，没有用Matrigel包被，结果是有细胞穿过的。

cyperus

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# o1 i: q, v: W6 \/ t7 M) J1 _5 l
你用的什么细胞做侵袭？也是THP_1么
( ]0 p1 Z6 s+ n没用Matrigel包被的话，就跟趋化实验类似了。穿过的细胞多么

tingting2113

回复 cyperus 的帖子* U( a8 J! ~  j

5 w8 H1 {" h* ^. N& m* N( y8 R我们用内皮细胞做侵袭实验，目的是为了验证条件培养基的抑制侵袭作用，DMEM作为对照。效果还挺明显的。

cyperus

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" V5 I: Y- e+ a2 E
8 a) ]" ^+ l5 G好的，谢谢您的帮助。明天我再试试如何。
7 E( V. j; M* ]0 [( e3 q你放多少细胞在transwell里面，然后培养多长时间呢。这个时间也是关键
7 n* m' s$ F+ n$ a如果方便，可不可以告知呢
+ p6 E  G: I/ i5 j谢谢咯

tingting2113

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