transwell 用THP-1做趋化实验 求助

cyperus

各位前辈
+ I% @4 u5 \7 c. K0 Z9 o0 a) x最近在使用corning的5微米孔Transwell做趋化实验。使用的趋化对象是THP-1，测试肿瘤细胞对THP-1的召唤能力。
9 W' e- R2 @( S, z; Q' @% a) C我是收集培养过肿瘤细胞的培养基来做实验的，但是做了3次了还是没有细胞穿过...: \% e8 l# s+ T/ x: \6 n, P/ C! K
试过用Matrigel包被和不包被的Transwell，两次均没有细胞透膜。
" g4 }) K6 Z5 Q# A如果您做过类似的实验，请求给予指点。将不胜感激..3 h. l2 \" Q: h2 g* E

: e' `* J6 v& K' v9 C2 _

shaozi402

细胞直径有多大？5um的孔，细胞能否穿过？

cyperus

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, q9 m9 O- K- i+ O* ]
& s" N0 C4 c% V0 R  }趋化实验时候，细胞会通过变形移动到趋化因子较高浓度的地方。正常的人体，细胞的趋化亦是如此。
  v) b) ]# `6 k使用transwell时候，THP-1会变形穿过小孔移动。7 L8 M7 L" E% C3 t/ j/ i* D( T4 _
5um的孔径是适合THP-1穿孔的。详见conrning网页

tingting2113

实验过程应该没有问题，是不是细胞活力的问题呢？

cyperus

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0 u$ E& P" G2 M( L6 X
  a/ K  e) f3 ]3 Q6 Ftingting2113，您好5 G" x3 e! b% h9 w7 H
您之前做过类似的试验么?
3 D5 l. H0 L" z! N7 R5 H$ p细胞活性的话大约60%左右，但是在上室加细胞时候是按照活细胞数加样的。

tingting2113

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8 U6 w$ u$ O, R7 d: ^- Q8 c1 D! m8 w/ p" c6 r/ v/ c; C7 O
我用Transwell做过细胞的侵袭实验，和你这个过程差不多，之前没有做活力测定，只是选取对数生长期的细胞，没有用Matrigel包被，结果是有细胞穿过的。

cyperus

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0 q7 i! c, \- x! ~
( x1 l) [/ c2 w: ]你用的什么细胞做侵袭？也是THP_1么
  }0 `* O' q1 Q9 M& }9 v5 h没用Matrigel包被的话，就跟趋化实验类似了。穿过的细胞多么

tingting2113

回复 cyperus 的帖子' b- K6 I9 G! C8 j$ B3 @
, U0 _8 g6 I- ], N5 z7 ~' J- e7 ?
我们用内皮细胞做侵袭实验，目的是为了验证条件培养基的抑制侵袭作用，DMEM作为对照。效果还挺明显的。

cyperus

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/ [4 L% G* L, F$ e  A+ S
7 \7 [: p) V; r* N0 g好的，谢谢您的帮助。明天我再试试如何。
5 L  x3 F4 ]' q, U8 H. x/ p你放多少细胞在transwell里面，然后培养多长时间呢。这个时间也是关键0 ^+ c( ]9 t9 L" z( {$ N
如果方便，可不可以告知呢1 H9 ]- ~" A9 u5 O' d: c5 D
谢谢咯

tingting2113

回复 cyperus 的帖子4 y! \; _, ]( C9 v3 Y
9 [4 G- I9 Q- F* Y/ K5 }; y* @% z3 I
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