流式分选后的细胞可以用同一抗体检测其纯度么？

Yorkshining

    如题，用单抗标记细胞进行正分选，可以用同一抗体检测其纯度么，是否有抗原封闭的原因导致检测的纯度降低呢？

yeshch

分选后直接取部分回测不就可以了吧，怎么还需要统一抗体检测纯度呢？

Yorkshining

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$ g, @/ T4 }) s+ L+ @因为细胞比例太小，分选到的细胞量太少，想扩增一下再检测，但是担心原来的抗体是否会封闭原来的抗原表位，导致检测的结果比实际的低，不知道您是有有这方面工作的经验？

cneagle66

需要看分选的抗体是否适用于流式吧。我是另买一个流式抗体做鉴定的。

yeshch

我们的目的细胞比例也不高，不过不是用来扩增的，所以分选出3-5万细胞也还可以回测，但是细胞损失确实很大。我没理解错的话，你的意思是担心上次附的抗体在扩增后下次检测中会有影响？如果我没理解错的话，我的意见是你不用担心那个问题（没听说过细胞都扩增几代了，原来的抗体还会在，即使在检测也会是>=实际量吧）

Yorkshining

非常感谢各位的热心回复

beyond2008

回复 Yorkshining 的帖子2 Q2 V% O* X6 b

! ~5 Z7 C* A* I( l. s7 M5 Y1 V: Z4 F+ b  C放心吧。直接取点细胞回测就行。不用担心分选时使用的抗体的影响。我做个和你相同的实验，没问题。加油，早日出结果。

Yorkshining

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' b& X6 s* m/ ?1 N7 G9 u主要我的细胞分选后即使是纯的 培养后它会伴随着分化又会不纯，所以培养一段时间后我必须得知道它的纯度是多少，所以在使用前必须用抗体检测哦 所以担心抗体的这个问题，您在培养后有重新用同一抗体检测么，检测结果是否有影响？

beyond2008

回复 Yorkshining 的帖子( Y& N: s& m( S2 W2 V0 J

6 X2 l1 M  s) `& o0 {, |$ \- g放心吧。你就直接用原来的抗体检测，你会发现有一定比例的细胞发生了分化。有人告诉我，他做过用流式抗体检测干细胞复制一代后分化比例为20%。

Yorkshining

回复 beyond2008 的帖子+ |- j0 h% k, M8 n0 L) W$ P
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好的  非常感谢！