如何使淋巴细胞分离液密度梯度离心后分离的细胞层明显清晰？

地球外世界

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4 `0 T0 O+ t$ b0 J4 Z嗯嗯，谢谢指点

121qwq

主要是下降时加速度调到最慢，离心管在整个操作过程轻拿轻放。你能做到这个，基本上没问题了。

edwardellen

我们操作的经验是400g比较好，转数要根据你们的离心机自己调，离心20分钟，要用低温离心机，用透明度好的离心管。$ |/ N  r' ^; J" }% `! c( m, D
血可以用生理盐水1:1稀释混匀之后再加到分层液上。; ^* @1 z1 Q4 W7 B3 ^
所有的操作，动作不要剧烈，心平气和，手要稳。, l, C2 Z; a. i
加血的时候，动作轻缓，将血滴到管壁上，让血滴慢慢滑落到分层液上。( U: g! ~& U, q% h
标记什么的提前做好，不要把东西都加完了，才想着标记什么的，晃动带样本的管子。
: X# y1 S. n; @3 R* z4 H* Y% [离心结束后，尽快吸白膜层，尽量不要吸到分层液。; p& G7 b2 t8 m
如果你都做到了，还是分层不好，那有可能是血的问题，毕竟每个人的健康状况都不一样，不是每个人都跟教科书一样健康，个体差异都是难免的。

myylovewp

2000-2500转/分，一定把降速设置一下（慢降），温度也会有影响，要20度左右吧。

fangtaoye

要慢慢的把样品加到淋巴分离液，沿着管壁慢慢加入即可，我们的比例是分离液比样品1：2的比例，然样品浮在分离液上面，拿的时候千万小心，尽量不要晃动，另外，楼主的转速太快了，我们是600G，还有就是降速的时候尽量慢。

momoenn

1.离心时要慢升慢降；离心机要稳，你可以在离心的时候把离心机装满，不要只单独离心两个管。
3 H! {+ z8 j/ w5 J- c, l- L& ]9 Z9 S2.离心转速和血量也有很重要的关系，如果50ml以上血液，可以采用600g转速，离心25min试试。0 g8 ^( `% _  {
3.离心效果和血液来源关系也不小，一样的过程，一样的条件，用外周血的话，白膜层回比较干净一些；但是如果是脐血，或多或少都会有红细胞。个人觉得ficoll分离用的是密度梯度离心，脐血各种细胞的密度和成人外周血相比可能还是有一定程度的差别。
7 j, F  r* \7 A$ ]4.温度，一定要控制在20度左右，还是因为是密度梯度离心，各种试剂的密度都是在20度条件下测得。