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药典2015版三部: 3 4 0 8 抗生素残留量检查法(培养法)0 z& W# b I% `! G
本法系依据在琼脂培养基内抗生素对微生物的抑制作用,比较对照品与供试品对接种的试验菌产生的抑菌圈的大小,检查供试品中氨苄西林或四环素残留量。
b7 s( g) I) q/ u& s2 N0 x磷酸盐缓冲液(P H 6 . 0 )的制备称取磷酸二氢钾8.0g、磷酸氢二钾2. Og,加水溶解并稀释至1000ml,经121°C灭菌3 0分钟。
8 e) L8 i: A4 p抗生素II 号培养基的制备称取胨6g、牛肉提取粉1.5g、酵母浸出粉6g,加人适量水溶解后,加人琼脂13〜14g,加热使之溶胀,滤过除去不溶物,加入葡萄糖lg,溶解后加水至1000ml,调p H 值使灭菌后为6. 5〜6. 6; 分装于玻璃管或锥形瓶中,经115°C灭菌30分钟,4°C保存。
& F, Y: T6 o b Z6 Q0 g对照品溶液的制备取氨苄西林对照品适量,用0.01mol/L盐酸溶解并稀释成每l m l中含氨苄西林10mg的溶液,精密量取适量,用磷酸盐缓冲液稀释成每l m l中4 z& ~$ P# J. X) U; K1 p8 U
含1.0微克的溶液。取四环素对照品适量,用生理氯化钠溶液溶解并稀释成每l m l中含0. 125ug 的溶液。
5 c5 {& K2 h; D0 U% `菌悬液的制备 (1) 金黄色葡萄球菌iStaphylocaccus aureus)悬液用于检测氨节西林。取金黄色葡萄球菌(C M C C 26003)营养琼脂斜面培养物,接种于营养琼
% R( T9 r) p4 b7 K脂斜面上,35〜37°C培养20〜2 2小时。临用时,用灭菌水或0 . 9 %无菌氯化钠溶液将菌苔洗下,备用。
Y; A3 J5 ^: |' o( p) H8 Q(2) 藤黄微球菌(Micrococcus lutcus~)悬液用于检测四环素。取藤黄微球菌[ C M C C (B) 28001] 营养琼脂斜面培养物,接种于营养琼脂斜面上,置26〜27°C培养
" c) O/ E1 V6 _' v5 M/ k0 r% V2 4小时。临用时,用0 . 9 %无菌氯化钠溶液将菌苔洗下,备用。 •
* _+ a0 o# n2 v检査法:取直径8 c m或1 0 c m的培养皿,注人融化的抗生素II号培养基15〜20ml,使在碟底内均匀摊布,放置水平台上使凝固,作为底层。取抗生素II号培养基10〜15ml置于1 支50°C水浴预热的试管中,加人0.5% 〜1.5% (ml/ml)的菌悬液30(^1混匀,取适量注人已铺制底层的培养皿中,放置水平台上,冷却后,在每个培养皿上等距离均匀放置钢管(内径6〜8 m m、壁厚1〜2 m m、管高10〜15mxn的不锈钢管,表面应光滑平整),于钢管中依次滴加供试品溶液、阴性对照溶液(磷酸盐缓冲液)及对照品溶液。培养皿置37°C培养18〜2 2小时。) l% Y" a: A+ W1 c
结果判定 对照品溶液有抑菌圈,阴性对照溶液无抑菌圈。供试品溶液抑菌圈的直径小于对照品溶液抑菌圈的直径时判为阴性;否则判为阳性。
{8 B! N8 c/ C, i/ k1 Z【附注】本试验应在无菌条件下进行,使用的玻璃仪器、钢管等应无菌。 |
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