拟胚体总是状态很差，肿么办

周小木

请问下悬浮培养做的EB总是感觉比较散（两三天换一次液，换前都稍微吹了一下），而且总体感觉比较黑，重复了两三次还是老样子，有什么办法吗，可以加血清什么的改善一下吗

watchen198891

能够说一下你做拟胚体的方法吗？以及培养体系，你的EB成型怎么样？上张图瞧一瞧。

周小木

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/ f0 K  ?, f! z8 F# j3 p
15%KSR, 2mM非必需氨基酸, 2mM L-谷氨酰胺, 0.1mM β巯基乙醇，做EB的方法就是直接从feeder上切下克隆进行悬浮培养，EB成型如图，这是养了7天的EB，隔一天换一次液，这是换液后第二天的情况

周小木

回复 watchen198891 的帖子6 M: o6 ]( ~, ~' U' r% i, v0 K

& L0 S2 w$ L8 p# f1 F# @0 u不好意思，图没发上来

2015-10-16 21:24 上传

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周小木

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7 t& q7 f( Z% i) Q0 z: E) C
% C, X/ f9 W7 C1 U( K" i" ?

2015-10-16 21:28 上传

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2015-10-16 21:27 上传

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大概就这样，拍得急了点，视野有点暗

chenyinan0214

这个好像是没有形成拟胚体，拟胚体很圆

缥飘实验员

为什么这么黑，我的克隆团形成的 EB 也是很圆的，拍照也是很透亮的，你这个形态不好判断啊，估计需要自己找找原因，你可以列出自己的原因让大家分析分析

watchen198891

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& c6 s4 n8 N% J, w+ ~+ p  f! e8 q$ O" D7 q" G4 E
你这个没有形成拟胚体，估计你制备EB的时候的方法出现了问题，另外你的ES状态是不是也有问题。

未来之星

回复 周小木 的帖子  V* b! K8 x: [' j; C. `

/ w, F3 |  Q* Q7 _! a& m" b细胞之前有没有消化处理过( P4 ?& M: V$ c- K/ A& a  A

cortex

你这些细胞发黑看上去好像已经不行了。建议刚开始的时候使用干细胞培养基试试，同时细胞团块密度弄高些。换液不用太勤。建议刚开始只往里面加。