ES细胞培养问题小贴士

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ES细胞培养时经常出现细胞污染、细胞死亡、增长停止等情况，但是却找不到其中的原因。下面就与大家分享下其中的一些经验：  1 V5 H1 H  x, {( L0 w) p7 h
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1. 细胞培养时要规范标准。  通常培养细胞时会出现污染等问题很大程度原因是由于我们在培养细胞时操作方法不够标准没有处理好所造成的，因此在培养细胞时需要加强操作规范。 5 }# k3 [) R6 K- b

: b, A! i+ u0 x' E, e2 `(1) 严格控制无菌操作。在培养设备和耗材都准备好以后就要做好日常的消毒工作严格控制细菌、真菌、微生物等常见的污染。如果条件有限的情况下可以在培养基中添加适当的抗生素来防止污染。但是这往往会影响到细胞的培养，因此要谨慎。 : g: [  T' K* A2 X! q& s
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(2) 培养环境需要每日观察。特别是很多细胞培养时都会在培养箱中进行，其中温度、适度以及二氧化碳的浓度都会有严格的要求，如果在培养时设备中的环境出现了偏差那么细胞培养时自然会出现问题，因此在培养时应当严格检测好培养设备及环境。
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(3) 细胞培养基及相关试剂的选择。培养时会用到培养基、血清、试剂等物品但是选择的产品应该是出自正规厂家的优质产品，劣质的产品往往技术不过关其中包含很多有害物质，因此不建议使用。
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2. 细胞扩增时间过长导致细胞老化、生长缓慢。  通常MEF细胞培养到3-4代后，增长速度就会明显变慢，因此我们建议培养一段时间后应该用丝裂霉素进行处理、技术并冻存，在需要细胞时复苏后即可使用。  
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( Y6 `! _5 B& |7 d5 f3.hES对培养层细胞的要求。  MEF细胞通常是作为人胚胎干细胞的饲养层来使用，虽然两者的培养有相似之处，但是人胚胎干细胞有其自身的特点。
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+ ]+ P* [. C; o5 l9 \' k+ X3 g(1) 品系要求不同。 1 _+ r- o8 ^+ u8 b6 h

; p. _$ @7 _  t(2) hES饲养层的小鼠细胞应该采取不大于12.5天的小鼠胚胎。  % ^- d2 H, J5 Z/ [. Q. C1 k! Y4 `
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(3) 不能够无限扩增通常第二代就应该用丝裂霉素处理。  
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: |9 Q: o, \; E# c3 P(4)在铺饲养层之前必须用基质胶来处理下培养板或培养皿。