羊膜上皮细胞分离有哪些技巧

wjydc1999

羊膜上皮细胞分离，得到的细胞少，且不贴壁，本人新手，求高手指导，急。多谢

watchen198891

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0 S7 V+ @: B( g3 z- I
  @  @% B" X1 o5 V1 U) X你先说说你的操作流程，这样大家才能给出建议。

wjydc1999

回复 watchen198891 的帖子8 G* }% N4 I  w

' k% L4 f; F) q. p5 ~5 a先用PBS清洗，去除血块，黏液，再用0.025%预处理液处理10分钟，去除预处理液，再用0.05%胰酶消化30min ，后用含血清的DMDEM-F12终止消化，收集消化液1500转离心5分钟，过滤，培养。   0.25%胰酶也试过，还是得到的细胞少。求指教。

帝国黑骑士

回复 wjydc1999 的帖子; A( G' e4 Y" r3 Q0 M& [1 O7 p
# {7 \+ t, s9 J+ M" M" E; m7 I9 s
你消化的是否充分，接种前有没有先计下数，我建议你可以剪碎消化，第一遍过滤过的组织再消化一次洗涤过滤试一试！

wjydc1999

回复 帝国黑骑士 的帖子/ l7 b* g& A/ y  v
: ]7 @0 Q% U( T
每次消化终止后，我都将膜挑出，显微镜下看到细胞都消化下来了，所以没有第二次消化。好像每次细胞里的黏液很多。

watchen198891

回复 wjydc1999 的帖子# P/ U5 K' ?" i8 P- U
! X$ {4 p/ ]: U7 d
你用酶消化最好是混合酶，加点胶原酶，还有DNase，这样可能消化液不会粘稠了，而且消化的话也比较充分。我们一般组织块儿法，把羊膜剥离直接剪成1mm3的大小直接贴壁培养。

仰望着大神

必须要用胶原酶

小云龙

把组织块剪碎，用胶原酶和 dispase（分散酶）吧，

tingting2113

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* ~( G* Y2 R+ [( t2 ^5 i% l, N$ A- f
. N% G8 V% k! m. A# l: x: u一般处理组织我们都用胶原酶。要剪碎再消化，消化过程中最好记得震荡，会更充分一些。另外我想问问，预处理液是什么呢？