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标题: 人胎盘间充质干细胞问题？ [打印本页]

作者: hhxxattxs123 时间: 2012-6-4 09:57 标题: 人胎盘间充质干细胞问题？

请问组织块培养法长不出细胞来是什么原因，还有就是组织块容易飘起来？人胎盘最好是新鲜的对吗？有人培养这个细胞吗？有的话可以介绍下您的方法吗？谢谢

作者: grape 时间: 2012-6-4 13:54

本帖最后由 grape 于 2012-6-4 13:54 编辑
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回复 hhxxattxs123 的帖子/ }/ P" j4 v& I' u
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组织块容易漂起来一般是因为干烤时间不够。一般要烤1-4h不等。不知你目前烤了多长时间，再适当延长时间试试。9 d: e( A Q9 p! x& W; y
还有，将培养瓶翻转平放的时候要慢，以免液体冲击组织块导致漂起。3 p5 j" u2 O5 Q
人胎盘当然最好是新鲜的，离体时间越短越好，最好不超过3小时。& z$ T+ S7 l8 P7 G% r# u
我们一般用人脐带分离MSC。4 L" J- ^1 c9 J% Y
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作者: hhxxattxs123 时间: 2012-6-4 14:14

谢谢哦，我的是用培养皿，用的是羊膜组织，就是剪碎了，也没有酶来消化就贴在皿上，等了20分钟就加培养液了8 y2 a0 X) M" R; z$ `# l- S& X
时间长了，怕组织细胞死亡。

作者: 单个核细胞 时间: 2012-6-12 10:55

回复 hhxxattxs123 的帖子4 B% _, r: h2 L3 M2 _

你可以先试试脐带华通胶组织块贴壁，熟练之后再行其它胎盘组织来源间充干的培养，贴壁时间适当长一点，然后再加入完全配液，这样有利于组织贴壁牢固。另外，也可将培养瓶倒置加液，待3-4h之后翻瓶，使培养液缓慢流遍组织块周围，然后放置培养箱静置培养。* W1 v1 p, u( G
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参考帖子：1 {+ J1 T8 s% _8 ?5 |+ ~' ?6 b8 A
脐带间充质干细胞的贴壁分离方法：
http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html
请教华通氏胶的剥离：4 H& N9 B2 @6 L4 [5 D8 X
http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html
应用怎么样的培养技巧可以获得更完美脐带间充质干细胞：7 {) o0 y$ o8 s" s( s( X6 ^
http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html% i) Q: l3 S$ n
脐带间充质胶质的备置：
http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html- o1 O* @( S; V& n5 @) E4 B
脐带间充质细胞贴壁法出芽率怎么这么低：
http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html% [: d- ?; c% i3 a8 e2 t
脐带间充质贴壁法到底几天换液：
http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html; w4 i) ~' w2 \- J i+ I0 F

参考文献：- v) T: y3 r$ p3 S. Y- @3 l
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作者: 单个核细胞 时间: 2012-6-12 11:01

本帖最后由单个核细胞于 2012-6-12 11:02 编辑

回复 hhxxattxs123 的帖子
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贴壁法培养胎盘组织时，可取小叶，尽量清洗干净（去除红细胞），然后充分剪碎，可用吸管进行贴壁。贴壁3-4小时候（可以过夜），补加完全培养液，加液和转移的的时候务必小心，不要让培养液剧烈震荡，避免组织块漂起，培养箱静置培养，以后观察时也需小心操作。
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羊膜操作比较困难，太滑，不容易剪碎，其粘性不如华通胶，这就导致贴壁后很容易漂起，可慢慢摸索。

作者: xiaolong 时间: 2012-6-12 11:15

回复 hhxxattxs123 的帖子$ |0 P7 H0 V# W3 y
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20分钟就加液时间太短了，1小时试试，可以参考一些华通胶贴壁培养的文献中贴壁的时间

作者: hhxxattxs123 时间: 2012-6-14 07:55

回复单个核细胞的帖子
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非常感谢啊，我最近在用你的建议来做，效果比以前强了呀，

作者: 回到从前 时间: 2012-10-26 14:51

建议你还是选择胶质多的地方贴块，块尽量别太大，倒置2小时以上应该可以我们做过就是细胞比较杂

作者: sailree 时间: 2012-12-6 15:20

说一个简单点的方法，在100mm培养皿中加上2ml培养液然后将处理干净的组织放在这2ml的培养液里，然后用剪刀剪碎后，平铺开放培养箱24小时后补液至10ml，一般约5-6天半换。10天开始观察细胞，并全换以后3天换一次液。

作者: 院士站 时间: 2012-12-12 09:05

是不是加液太多

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