干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

标题: mRNA的表达量与Western blot检测的一致性 [打印本页]

作者: 燕北飞 时间: 2012-6-6 17:09 标题: mRNA的表达量与Western blot检测的一致性

大家有没有碰到过这样的情况，检测某基因的表达量时，qRT-PCR和Western blot检测不一致？

作者: runsong 时间: 2012-6-6 19:07

有的，有篇文章上检测sox2在小鼠睾丸上的表达，RNA很强，蛋白没有。

作者: xiaomao_zhoubo 时间: 2012-6-6 23:10

转录后需要翻译才能产生蛋白，而翻译受很多因素调控，因此两者不一致是有可能的

作者: 燕北飞 时间: 2012-6-6 23:36

回复 xiaomao_zhoubo 的帖子
4 G( }% q1 ]' l
呵呵，我再加一句，miRNA不需要翻译成蛋白，所以qRT-PCR用来检测miRNA的表达效果是可信的，检测某基因的表达却不一定可信。

作者: minshuyin 时间: 2012-6-7 09:27

回复燕北飞的帖子
k3 T. \. R) c1 M; E. t
您的意思是miRNA在RNA水平和蛋白水平不可比？

作者: illidancui 时间: 2012-6-7 09:40

miRNA属于非编码RNA，以RNA形式就发挥功能了呀。

作者: 燕北飞 时间: 2012-6-7 14:35

回复 minshuyin 的帖子
, y9 Z: k- }9 `* o- }2 L
是mRNA与蛋白水平很多情况下是不一致的。miRNA只有RNA水平，没有蛋白水平。

作者: linzi214 时间: 2012-6-7 15:35

真正起功能的是蛋白，由于mRNA转录出来受miRNA调控和其他修饰的调控，因此mRNA不一定翻译为蛋白，功能蛋白检测蛋白表达水平结果更可信（miRNA除外）。

作者: minshuyin 时间: 2012-6-9 09:20

回复燕北飞的帖子, s6 f% {: U3 {$ o5 T

是的，但是很多人做miRNA实验，发表的论文中经常会有mRNA水平变化不大，蛋白水平差异明显啊。

作者: 燕北飞 时间: 2012-6-10 20:00

回复 minshuyin 的帖子

你说的这个是miRNA的调控方式问题，从miRNA沉默靶基因mRNA的方式上分析，miRNA不会降低靶基因mRNA的水平，只能沉静蛋白表达，我个人不认同很多文献里细胞实验的结果。感觉改变miRNA水平后的细胞拿来做基因芯片筛选靶基因的方式不可信！

作者: Yedan 时间: 2012-6-10 20:27

回复燕北飞的帖子

你说的这个概念是老早以前对miRNA的理解了，或者说是plant miRNA的调控了。
mammamlian里miRNA主要target mRNA levels ， reference如下：
Mammalian microRNAs predominantly act to decrease target mRNA levels 8 ]5 o w% c: X0 X5 {; x; Q% M. O
Nature 466 2010
所以改变miRNA水平后去做microarray是完全合情合理的。

作者: 燕北飞 时间: 2012-6-10 21:20

回复 Yedan 的帖子

“改变miRNA水平后去做microarray是完全合情合理的。”我也觉得合理，但是不赞同，借用一句广告词“基因芯片，谁用谁知道！”

作者: 燕北飞 时间: 2012-6-10 21:25

更正一下，“感觉改变miRNA水平后的细胞拿来做基因芯片筛选靶基因的方式不可信！”这句说的太主观，现改为“改变miRNA水平后的细胞拿来做基因芯片筛选靶基因的方式，不一定能找到有意义的靶基因及其下游信号通路”

作者: Yedan 时间: 2012-6-12 22:53

回复燕北飞的帖子

如果像您这么说的话，所有的实验都很tricky了，western如此，confocal如此。: B* O! n+ u- D7 I0 J1 n: f6 P2 G
不管做出什么结果，你自己先得相信，如果你自己都不敢信，那还好意思报道出去么。

作者: 燕北飞 时间: 2012-6-14 09:34

不要问题扩大化了，要客观，我的意思你可能没有完全理解，做实验不是一厢情愿就可以的，不要自信要客观，不求认可求真实！

作者: 细胞海洋 时间: 2012-6-15 01:03

回复 Yedan 的帖子
# `1 t( t$ a, s! u: U- V- ?

作者: 细胞海洋 时间: 2012-6-15 01:03

回复燕北飞的帖子; E' Q( c z# U" N
! i8 I$ I5 A: `$ ^# T1 ^

作者: Yedan 时间: 2012-6-15 13:05

回复燕北飞的帖子' ?4 }1 {8 w) m4 S0 |

客观……这么跟你说吧，老外有时候发文章，别人重复不出来，发e-mail去问，老外会说做了6次有1次出现了这个结果，我们就报道了，然后就没有了。只有国内才会重复了再重复，其实很多时候我们丢掉的tricky的结果被我们忽略了，但是可能那是将来的重大发现。当然我说的国外的现象不是普遍的，只是实例罢了。

作者: wuhuizi 时间: 2013-4-9 21:07

经常有这种现象

作者: librakumi 时间: 2016-4-20 11:09

请教一下，如果是miRNA受到抑制后的实验中，验证其靶基因mRNA的表达量上升了，要如何解释呢？

作者: 细胞海洋 时间: 2016-4-21 19:15

回复 librakumi 的帖子: d7 E9 f& \7 S/ G

建议你发新帖提问

作者: cellprobe 时间: 2017-3-27 02:23

mRNA和蛋白质的表达水平不一定是一致的，mRNA本身要受到很多因素的调控，比如miRNA

欢迎光临干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 (http://www.stemcell8.cn/)

Powered by Discuz! X1.5