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标题: 组织贴壁法分离脐带来源间冲质干细胞的困惑 [打印本页]

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作者: 小夏    时间: 2014-6-25 12:09     标题: 组织贴壁法分离脐带来源间冲质干细胞的困惑

        采用组织贴壁法分离脐带来源的间冲质干细胞，组织块游离出的细胞很少或者基本没有，求教各位前辈：有那些原因会造成这种情况？

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作者: 伊诺强    时间: 2014-6-25 14:01

你先说你是怎么养的才能知道问题出在哪里

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作者: 小夏    时间: 2014-6-25 14:15

回复 伊诺强 的帖子
4 X6 f) A# F1 y& ^* z4 ?. B) R1 g+ W
/ c* |3 v9 {. ?5 V把脐带清洗干净，剪成小段，剖开，剔除动静脉，分离出沃顿胶，剪成大约1cm3的小块，铺于75培养瓶。

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作者: 伊诺强    时间: 2014-6-25 14:18

确定是1cm3的小块？

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作者: 伊诺强    时间: 2014-6-25 14:19

培养基的选择，成分，添加量等等...........最主要的都没说

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作者: 小夏    时间: 2014-6-25 14:26

回复 伊诺强 的帖子
% h# H/ S4 x+ d  P) [; O- C" o$ D9 b' l- p$ P( ^5 g
大约

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作者: 小夏    时间: 2014-6-25 14:31

回复 伊诺强 的帖子
, |6 o! p4 A: o$ `. I: ]' ^6 h9 E% w. j4 l/ M
   无血清培养基，添加血清替代物，谷氨酰胺。

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作者: 屋檐上的乌鸦    时间: 2014-6-25 21:23

你得剪碎组织块~！1CM3太大了

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作者: fuyinsheng    时间: 2014-6-25 22:22

一是确定自己所加的培养基、血清、谷氨酰胺等成分没什么问题；# H1 C, ?* Y$ K: \
二是脐带消毒处理时间不宜过长，会造成细胞活性丢失
" h" _$ j; x2 t9 U4 }* L三是脐带要剪的碎一些- F0 b, N3 @% b1 Z4 L  F( f) F
四是T75培养瓶中接种时培养基加11ml左右即可，加得过多影响细胞贴壁

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作者: fuyinsheng    时间: 2014-6-25 22:23

另外确定自己的脐带是新鲜的，放置时间太长活细胞也基本没有了

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作者: 单个核细胞    时间: 2014-6-26 08:36


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作者: 子非鱼    时间: 2014-6-26 08:55


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作者: 屋檐上的乌鸦    时间: 2014-6-29 22:06

回复 fuyinsheng 的帖子/ x, t/ I; G- B+ A( c8 V

% I' K: B9 n4 C% p- o8 }# c+ ~刚开始就加11ml的培养液，组织块都漂浮起来，很难贴壁的吧。我们一般是先少加，隔夜差不多贴壁了再补液！

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作者: zarecol    时间: 2014-7-2 15:22

你所说的方法并没有很大的问题，我分析你的问题主要出在细节上了。不知道你使用的是倒置干涸法还是加入少量培养液过夜的方法，建议你使用导致干涸法，这种方法的组织块贴壁较捞，另外，你在培养初期最好不要总是看细胞，起始的5天最好不看，需要换液就换液，不要有多余的操作，一般的话7天的时候再仔细看，如果你操作没有失误，培养液没有问题的话，肯定会有很多细胞爬出来。

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作者: 448922239    时间: 2014-7-3 14:36

1、组织块不能种的太大，1cm的太大了，2、定期给培养的组织块换液、并注意观察

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