大鼠骨髓MSC为什么只那么少

yiwuya007

用4周左右雄性SD大鼠，四肢骨髓冲洗，最近几次做下来，只能种在6孔板的1-2个孔，以前做可以种2-3个100mm的大皿，实在想不出来为什么。冲洗时间太久，细胞死了？双抗的原因？大鼠太小了，骨髓少？1 h4 n( N6 U) Q% W7 C+ P
请大家支招，哪里出了问题？

lgfffancy

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6 q$ Z6 H9 D- V- I3 i- b其他都有可能，唯一大鼠太小了，骨髓少，这个我不太赞成。如果大鼠是健康的，这个年龄的大鼠骨髓不应该太少。

pengxuleo

回复 yiwuya007 的帖子3 `7 v, X3 Y/ q. S" H1 i9 S. ], \  N

  b: d" H( e1 p! x2 F0 F9 _* k首先，4肢是没有必要的...前肢试验过几次了，都不成功...后肢就足够了
( }9 s3 w) f2 T* P  L& D其次，4周龄大鼠的BMSC分离，差不多1只大鼠，1-2个10cm皿，没有问题的
$ A9 s6 y: r$ q& D5 o+ W, {% y问题，可能是培养基和血清什么的...是不是最近换过，或者分离过程中消毒时间太久了，细胞活性下降了...

yiwuya007

回复 pengxuleo 的帖子! ]) D: o5 h3 t0 ~, U* D

" R" A: g1 T' S8 b; {  v因为没多少贴壁细胞，培养基换了几种，血清用了gibco和hyclone，都这样
; |. Y& Q  t) ~/ i0 G消毒，就是整只动物在酒精中泡5-10分钟，分出四肢，PBS洗了很多次

pengxuleo

回复 yiwuya007 的帖子' H) k1 |5 v+ H' ~8 R5 k
; B1 h. B, a* Z& T
培养基和血清 都用hyclone 的吧，我们实验室用的这个，还是挺好的

firstaider

用后肢吧，不可能少的