大鼠骨髓MSC为什么只那么少

yiwuya007

用4周左右雄性SD大鼠，四肢骨髓冲洗，最近几次做下来，只能种在6孔板的1-2个孔，以前做可以种2-3个100mm的大皿，实在想不出来为什么。冲洗时间太久，细胞死了？双抗的原因？大鼠太小了，骨髓少？
0 Z0 g9 K  Y: V- |" p- J  L) }请大家支招，哪里出了问题？

lgfffancy

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' S6 q. x+ y' u0 ^其他都有可能，唯一大鼠太小了，骨髓少，这个我不太赞成。如果大鼠是健康的，这个年龄的大鼠骨髓不应该太少。

pengxuleo

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2 v* m# V. ~& r; \1 E9 x3 C& }
) m2 w) Q2 c! Y5 C/ y: h- M首先，4肢是没有必要的...前肢试验过几次了，都不成功...后肢就足够了; o% n* X0 M) a, o& r2 b
其次，4周龄大鼠的BMSC分离，差不多1只大鼠，1-2个10cm皿，没有问题的
  M  v0 f1 J+ e7 Q$ n- c8 V问题，可能是培养基和血清什么的...是不是最近换过，或者分离过程中消毒时间太久了，细胞活性下降了...

yiwuya007

回复 pengxuleo 的帖子$ i6 J) p4 U. Z; S/ @" @! a/ H
( i6 c8 r& g7 D  d7 i; A8 s
因为没多少贴壁细胞，培养基换了几种，血清用了gibco和hyclone，都这样
( c3 G# P+ ^/ J3 Y6 v% V6 H消毒，就是整只动物在酒精中泡5-10分钟，分出四肢，PBS洗了很多次

pengxuleo

回复 yiwuya007 的帖子* I/ n% P* c5 M: W1 M

0 a; V7 ]( B4 n+ r: p" M3 b培养基和血清 都用hyclone 的吧，我们实验室用的这个，还是挺好的

firstaider

用后肢吧，不可能少的