大鼠骨髓MSC为什么只那么少

yiwuya007

用4周左右雄性SD大鼠，四肢骨髓冲洗，最近几次做下来，只能种在6孔板的1-2个孔，以前做可以种2-3个100mm的大皿，实在想不出来为什么。冲洗时间太久，细胞死了？双抗的原因？大鼠太小了，骨髓少？
& f' \( q1 L7 J/ w" B0 r1 ^请大家支招，哪里出了问题？

firstaider

用后肢吧，不可能少的

pengxuleo

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培养基和血清 都用hyclone 的吧，我们实验室用的这个，还是挺好的

yiwuya007

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因为没多少贴壁细胞，培养基换了几种，血清用了gibco和hyclone，都这样
: T! F! ^% f$ H* j; e/ O$ \1 a消毒，就是整只动物在酒精中泡5-10分钟，分出四肢，PBS洗了很多次

pengxuleo

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" V0 g) N, H+ l0 M! [6 ~+ X: k- t$ @2 S" C7 S
首先，4肢是没有必要的...前肢试验过几次了，都不成功...后肢就足够了
+ M* ]' M! u0 R* a2 y其次，4周龄大鼠的BMSC分离，差不多1只大鼠，1-2个10cm皿，没有问题的
4 w4 A6 s6 X& ]$ w( j2 `. m7 r4 K+ y# V7 Y问题，可能是培养基和血清什么的...是不是最近换过，或者分离过程中消毒时间太久了，细胞活性下降了...

lgfffancy

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/ P6 J" q/ B) f& S6 r" v& d其他都有可能，唯一大鼠太小了，骨髓少，这个我不太赞成。如果大鼠是健康的，这个年龄的大鼠骨髓不应该太少。