脐带间充质干细胞分离

jddakui

脐带间充质干细胞分离消化，华通胶用1型酶到底对细胞损伤有多大？2个小时消化剩余组织块不多，但是也没分离出多少细胞啊？求解

游遍芳丛pine

可以试试组织贴壁法培养，细胞纯度较高，状态也会好些，不过时间相对较长。

yaolinzhang

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7 ]% u4 }( W4 E/ W8 g* b% J4 n* y9 M5 V8 z# l
用sigma的collagenaseA 1mg/ml试试，建议37°水浴消化2h，每15min震荡一次

fjq729587158

你可以试一下0.01%II型胶原酶，细胞量还可以。

jddakui

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2 A0 c; h; x; R* X1500rpm  ，就是重悬看不见多少亮的圆细胞  倒是瓶底很多小黑点点调节显微镜 黑点会变亮。脐带干细胞悬浮时跟脂肪的应该差不多吧

木头1102

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) T" H: E0 A) m& n6 @1500？是转速还是离心力？我消化后是10倍的PBS稀释，100目过滤，2500rpm（约800g）离心15min，PBS重悬，1500rpm离心5min，培养液重悬后接种。一般会有许多残渣悬浮在培养液里，但也可见细胞（发亮的圆点）。我觉得你可以先培养这看看，过五六天在观察下有没有细胞贴壁。

jddakui

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5 @+ Y3 T  f6 W0 u  p2 B2 y2 @1 u9 T$ G7 f" Q6 p. e- V* n
5ml组织块 1mm   0,1%胶原酶1     消化后+20ml培养基100目过滤 1500 离心10min  5ml重悬  没看见什么细胞啊
) A! J9 S4 d1 q; d" M% X求指导 谢谢
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木头1102

组织量多少？胶原酶的浓度？消化之后你怎么处理的？