间充质干细胞的慢病毒转染效率问题

liqiang8589

最近想用慢病毒过表达干细胞。 在293包病毒的时候效率高， 但是把病毒转染到干细胞的时候，却效率很低。 有哪位大神可以告诉我干细胞转染的时候注意事项或特别用的试剂。 我用的是 polybrene (8ug/ml) 转染试剂。0 m; m, y$ m8 ^9 d

yeshch

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% |0 O6 E+ F* \* H我也遇到了类似的情况，第二次采用了二次感染的方法成功了；但是感染之后的细胞几乎不生长不知道怎么回事啊？请问你现在做的怎样啊？方便交流一下吗？9、8、5、3、4、0、2、6、2

firstaider

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3 {5 B" n4 F+ s, o# r" L病毒滴度一定要高，多次感染或者直接用浓缩试剂盒吧

haibara007007

回复 liqiang8589 的帖子, G1 U. v# u7 r! G+ |5 t' M) d* Q
- I* D) D3 U+ I( \" V
一定要注意病毒滴度啊，用浓缩柱浓缩一下，要不转染会很费劲

yaolinzhang

回复 liqiang8589 的帖子- T6 f( L' j" q& ~& |! S. E. L

- x8 A, |2 l6 [2 s你可以 去Hyclone网站上试试，不过这方面我倒没用过，建议还是买进口的

liqiang8589

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谢谢老师
% l; F2 |* w- T( s, |; `- d" G除了超高速离心慢病毒外有好一点的浓缩试剂盒吗？？

yaolinzhang

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293很好感染的，但MSC就没那么容易了，估计你的病毒滴度不够，慢病毒的实验滴度很重要

liqiang8589

有的论文有慢病毒转染之后用离心来提高效率，这个方法有用吗？？

liqiang8589

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3 g+ H; K) t5 p/ u( o3 r* ^( r3 ~+ H  _1 A- a
我用293FT 细胞来做对照组 9 S: c( x& t% Y$ M8 n  w
293有50%有表达GFP， 但是间充质干细胞一个都没有表达。

lgfffancy

首先，可以肯定的是ploybrene的用量是没有问题的，我们实验室都是用的这个浓度，是没有问题的，所以可以排除polybrene的影响。其次有两个很重要的问题就是，细胞状态、密度，病毒滴度，这三个因素应该都好控制；不用灰心多试几次，一定能够成功的。