间充质干细胞的慢病毒转染效率问题

liqiang8589

最近想用慢病毒过表达干细胞。 在293包病毒的时候效率高， 但是把病毒转染到干细胞的时候，却效率很低。 有哪位大神可以告诉我干细胞转染的时候注意事项或特别用的试剂。 我用的是 polybrene (8ug/ml) 转染试剂。3 t: J, X4 c3 K2 F# m  O$ u3 }

yaolinzhang

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3 ?% t/ P5 _& B' J0 R0 i. N8 k需要注意的地方：1.细胞状态需要好；2.细胞接种密度，不能过密，50-60%即可；3.病毒滴度，慢病毒感染间充质的MOI大概在50左右，所以病毒滴度一定要高，这很重要；4.polybrene对细胞有毒性，注意用量

ljzmy82

可以二次转染一下，效果就好很多

lgfffancy

首先，可以肯定的是ploybrene的用量是没有问题的，我们实验室都是用的这个浓度，是没有问题的，所以可以排除polybrene的影响。其次有两个很重要的问题就是，细胞状态、密度，病毒滴度，这三个因素应该都好控制；不用灰心多试几次，一定能够成功的。

liqiang8589

回复 yaolinzhang 的帖子% c: W7 c2 }3 n- r) c  H: `
& r5 f! ]" D! a5 s. U' M% H
我用293FT 细胞来做对照组 5 X( W; w- w" S
293有50%有表达GFP， 但是间充质干细胞一个都没有表达。

liqiang8589

有的论文有慢病毒转染之后用离心来提高效率，这个方法有用吗？？

yaolinzhang

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) R0 J$ Q; Q3 @- {! I5 P8 E9 s293很好感染的，但MSC就没那么容易了，估计你的病毒滴度不够，慢病毒的实验滴度很重要

liqiang8589

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谢谢老师
# z" H* d& y$ M3 B9 V0 Z除了超高速离心慢病毒外有好一点的浓缩试剂盒吗？？

yaolinzhang

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你可以 去Hyclone网站上试试，不过这方面我倒没用过，建议还是买进口的

haibara007007

回复 liqiang8589 的帖子2 @$ ~2 _- {+ q' `

6 V' y4 Y% ^) ]; r& L一定要注意病毒滴度啊，用浓缩柱浓缩一下，要不转染会很费劲