免疫荧光染色步骤 越详细越好

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免疫荧光染色步骤的文章或视频     越详细越好 谢谢

moluxingke

看文章看视频，真不如在自己详细了解相关原理之后，动手做上一遍。然后再把遇到的有关问题请教其他人。

jenny114402

免疫荧光分为胞内核蛋白和表面蛋白
' q4 T5 Z1 N7 ]3 Z# B核内蛋白染色步骤：
' k2 \0 g# H3 a. w1.在24孔板内接种细胞，1ml培养基培养，待细胞长到30%-50%染色6 W; O+ J% {) }! s# i: q' M# H
2.吸弃培养基，PBS洗两次
5 e: \9 I7 ^5 ?! E  L$ s3.4%的多聚甲醛固定25min
( D" [% x8 h4 b5 ^4.PBS洗3遍+ P2 ~. Y5 V. F
5.250ul 0.25%TritonX-100，室温20min
/ q; n5 x, y/ N$ y+ {6.PBS洗3遍
7 T/ E3 {7 m! z) M/ S4 W7.200ul 10%的山羊血清，室温封闭30min# F3 s& J* j# v0 H, \
8.弃封闭液，加一抗，避光4度过夜
8 u4 E6 [3 T; X  D' ~7 i/ N( x9.PBS洗3遍
# y, e% c7 C# b( U10.加二抗，避光室温2h# w, E6 W: C& d& M. q
11.加稀释好的PI/DAPI，避光室温20min
% ^3 X: }1 T( m7 @" y! ]12.PBS洗3遍，镜检。

jenny114402

表面蛋白省去TritonX-100打孔

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* T& C( g7 _2 e6 d  U1 ^( H2 {" |9 R/ ?: j% i8 H8 n; b% s7 D& C1 y3 q
OK  , ?' K+ e6 K  Y9 P6 `

倒腾细胞

回复 jenny114402 的帖子7 d9 [! \$ K" Q

6 k. t% q: D- M! y请教前辈 细胞量有没有讲究  现在在六孔板培养大鼠MSC 过几天想做免疫荧光看细胞fibronectin和iNOS的表达  第一次做没有任何经验！细胞爬片又是有什么用处。

jenny114402

回复 倒腾细胞 的帖子# V" {! c$ R* |7 O! \0 A! S

+ Q  \& J" `5 x. i我做的是人的MSC，细胞量是5*103， 第二天做的免疫荧光

jenny114402

回复 倒腾细胞 的帖子" r. Y. I# Y# l

7 u9 W, i: K/ M/ j" w细胞爬片就是那个玻片是包被过的，有强吸附能力；说白了就是细胞不易洗掉。

jenny114402

回复 倒腾细胞 的帖子! w% J8 c- Q1 b6 y

: }, _1 m- c& V) x$ A我说的是5*103是24孔板的细胞量，我们一直都用24孔板做免疫荧光，检测mark有点多

倒腾细胞

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8 L. F! j! T0 ^7 Q9 r' t2 ^
) O7 |+ F! V" U& z- [, h$ x  e我得先用六孔板做transwell间接共培养24h  之后打算接着就用六孔板做IF  不过貌似细胞数量就很多了。。。。。难道要24h再消下来重新计数接种到24孔板吗？