免疫荧光染色步骤 越详细越好

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免疫荧光染色步骤的文章或视频     越详细越好 谢谢

moluxingke

看文章看视频，真不如在自己详细了解相关原理之后，动手做上一遍。然后再把遇到的有关问题请教其他人。

jenny114402

免疫荧光分为胞内核蛋白和表面蛋白: X% i% h5 s2 a5 O- _
核内蛋白染色步骤：; h/ {: f; j5 o/ E
1.在24孔板内接种细胞，1ml培养基培养，待细胞长到30%-50%染色
% t. n. O& z" G- P) v5 {' ^2.吸弃培养基，PBS洗两次5 P$ U0 a/ R7 M
3.4%的多聚甲醛固定25min% D8 ]9 t0 |/ l' W
4.PBS洗3遍8 b8 j( \# B7 f+ d( v" j5 ~
5.250ul 0.25%TritonX-100，室温20min
5 r& i7 |$ I- g9 R' P+ j" H% g6.PBS洗3遍
  j7 o- @( v: E8 h4 \- e) ?" B( [0 ~7.200ul 10%的山羊血清，室温封闭30min
6 L  l) _' K! C7 S* L6 o8.弃封闭液，加一抗，避光4度过夜# t) }. D" T6 k  _
9.PBS洗3遍9 e# S6 i" {0 x4 k/ y" e  x
10.加二抗，避光室温2h
) t) g: }% S5 @4 M' W11.加稀释好的PI/DAPI，避光室温20min
; o2 r( d8 T) j2 e1 @% L8 O5 e% A12.PBS洗3遍，镜检。

jenny114402

表面蛋白省去TritonX-100打孔

1195963542

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5 Y; Z* ]3 \8 O2 Y+ J) i- c0 k- ^# f  g: q
OK  
' |. a! n9 V! z1 P$ |( L

倒腾细胞

回复 jenny114402 的帖子; V- N+ ~7 D$ y& m& c
( E  F6 _) e$ n
请教前辈 细胞量有没有讲究  现在在六孔板培养大鼠MSC 过几天想做免疫荧光看细胞fibronectin和iNOS的表达  第一次做没有任何经验！细胞爬片又是有什么用处。

jenny114402

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' D% n1 w: l. i6 ]* d6 H+ F6 Y7 \/ a! U5 D9 A3 H( x" P
我做的是人的MSC，细胞量是5*103， 第二天做的免疫荧光

jenny114402

回复 倒腾细胞 的帖子7 {3 U- v* K* H; [' V0 l
: v# x3 s( ?$ k- m
细胞爬片就是那个玻片是包被过的，有强吸附能力；说白了就是细胞不易洗掉。

jenny114402

回复 倒腾细胞 的帖子& ^9 ?) U) k1 H7 ?

! r' T/ w+ p9 l7 o我说的是5*103是24孔板的细胞量，我们一直都用24孔板做免疫荧光，检测mark有点多

倒腾细胞

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3 c5 A% h/ B5 K1 Y5 \! S  e0 @% i4 G$ n+ }* H
我得先用六孔板做transwell间接共培养24h  之后打算接着就用六孔板做IF  不过貌似细胞数量就很多了。。。。。难道要24h再消下来重新计数接种到24孔板吗？