NK培养 谁知道这是那个文献的呢？多谢

xuexi123

5 V- k, V: F9 b9 i* r3 M' T2 Q7 B3 i& k: [) K& t
培养材料：+ G7 u8 C7 O. l( P% ?
无血清培养基GT -T551、生理盐水、淋巴细胞分离液Ficoll、人血白蛋白、自体血浆+ v" w0 X+ O9 l7 {5 J( y7 L
细胞因子：IL-2（1000IU/ml）、Anti-Human CD3（5ug/ml）、IL-12(500IU/ml）、IL-15(500IU/ml）: P# X. {# a( w$ y: q1 O% [+ O7 v9 d5 u8 `
操作步骤：9 X% q/ p0 |# I5 n, G) \6 Q" [" r6 k1 ?5 I8 @4 Z6 H3 x
1、采血机采集外周成分血50ml ，用生理盐水1:1进行稀释，1 v6 L' l# v' M# K! O
3 r: L# H- b2 h3 L2 x5 \: ^2、由Ficoll液分离，去红细胞，收集初步纯化的单个核细胞：经Ficoll液梯度离心分离单个核细胞，Ficoll液与待分离的单个核细胞悬液比例为3:5分离方法: 取新的50ml离心管，没管加入15mlFicoll分离液，将25ml单核细胞悬液，贴壁轻轻加入管中Ficoll液液面上，注意单个核细胞悬液的加入不能打破离心管中Ficoll液的液面，离心2000rpm/min，20min，升速1，降速0，离心后，液面分为四层，小心吸取第二层的单核细胞层，用无血清GT-T551洗涤2次，离心1800rpm/min，5min，20℃，弃去上清，再用5ml无血清培养液混悬。: [5 D) x) d7 b
8 z( e3 c" c  m1 x) ?' U3、细胞计数：吸取约200ul的细胞悬液与1.5mlEP管内，另取一个新的EP管加入90ul台盼蓝和10ul细胞悬液，用血球计数板进计数。4 j7 Z7 M) F# i& H9 b0 x* m4 d  c" ~5 z  f( ^2 b( r6 s
4、将PBMC密度调整为2X106/ml，转入T75瓶中，培养基加入CD3McAb、IL-2、IL-12、IL-15，并置于培养箱中培养。每隔3d半量换液，并补充相应的细胞因子和自体血浆。5 p6 a  ^, Y; c1 k
5、收集悬浮细胞：培养第10d观察NK细胞并收获NK：将培养瓶内细胞悬液转移至50ml的离心管中，1800rpm,离心5min。去上清，用生理盐水再洗细胞2遍，最后将细胞组分混悬在100ml含1%人血清白蛋白注射用生理盐水中，转入细胞回输袋内，制成NK回输液。
& `5 i; w! w: y9 `( E6 Q

xblong

你这T细胞比例会很高

wozuixie

这个参考意义不大。/ L, y) h* Z1 i7 ~# ~

免疫与细胞

这个参考意义不大。

yingfeixiang

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) V0 m/ o6 @/ }. I. l7 [, C& h8 |
) S1 S6 A. ]3 J不是文献，是别人的总结

yingfeixiang

这个是别人发的，拷贝的吧

小沙弥敲木鱼

找到了么

飞翔的烨

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  H+ n  Y# H. u7 s+ B& R8 Q* E3 ]$ V
怎么可能这么简单

吕小松

IL-15的作用是什么？

baby00000003

也许是T－551的说明书吧？