从肿瘤组织中获取DC特异性抗原

momoenn

大虾们帮忙看看这是什么情况？
* K. \# S! k. Y. i3 x5 v第一次做肿瘤抗原制备。前一天临床上采集肿瘤组织后在冰箱里放置，第二天才处理，中间在-20°冰箱放置了。操作：酒精消毒1-2min，经生理盐水清洗3遍，取中间部分剪碎后，放置在细胞筛中研磨，如下图# Z$ C; U& p+ |+ F, e: ^
平板里放了一些培养基。研磨后取平板里的液体显微镜下观察，并离心，分别得到以下结果。! F4 Y7 c+ M7 X3 n
亲们给分析一下这是什么情况，谢谢啦！急问，在线等。

momoenn

回复 baby00000003 的帖子
! v% q- [- j3 b( |& B3 F2 u( q0 a* a0 N7 x( S% D
我现在还没处理完，后续还应该进行反复冻融，然后离心取上清得到最后产物。只是感觉现在状态不太对。

momoenn

回复 shunho-cell 的帖子
9 q9 j& f! Z; [: ~( a# N/ Y0 ^- d, R0 f0 a
研磨后应该得到肿瘤细胞的单细胞悬液，现在显微镜下基本观察不到细胞形态。离心得到的沉淀为什么是红色的呢？

momoenn

回复 baby00000003 的帖子# l* x( z2 \) X) x3 G
: S* r( w3 ^8 G# X- ~
研磨得到肿瘤细胞的单细胞悬液，再经42°和60°灭活。然后反复冻融得到肿瘤抗原。但是现在研磨后的液体看不到细胞形态。离心后颜色还特别红

momoenn

回复 baby00000003 的帖子3 z. t3 N. J3 a

: F4 B! O2 j. j. s中间有一步关键的步骤，是水浴灭活，应该是灭活的酶的活性。如果直接磨碎反复冻融的话，是不是可能会把目的蛋白给消化了。

momoenn

回复 lgfffancy 的帖子# r8 Y, h) c2 G9 _0 M. k8 u
, Q# P' s: K5 o# |8 d( K
昂，得到肿瘤细胞后再反复冻融得到肿瘤抗原

momoenn

回复 baby00000003 的帖子( m. V3 s  o: X% B! D
! c8 X9 T: B  K. L- K8 A; @
或者，有没有更好的办法让俺学习一下

momoenn

回复 baby00000003 的帖子
0 C7 f7 a) ?8 W, q! ?( p  m# m  |- t+ C) A
哦，谢谢

momoenn

回复 baby00000003 的帖子' z( T/ ?- g' K; E. m, i

2 S( V7 z' k5 h1 l& q还要诱导DC，尽量还是别加入外源蛋白吧

momoenn

回复 lgfffancy 的帖子9 v& @, a2 d; b/ z  O# }
- S2 [  x5 G* J4 u  e
额。死了再把它撕了吧