从肿瘤组织中获取DC特异性抗原

baby00000003

回复 momoenn 的帖子8 l; S) z4 v1 }& ^" y3 A0 x
# j9 H* [$ K0 }; G, [: n! Z4 P
俺还没做过成块儿的组织提抗原的，也许可以酶消成单细胞？

baby00000003

回复 momoenn 的帖子
  P, k& i, |! @+ d
& A) Y8 @& Q% H可以像做western裂细胞那样，加蛋白酶抑制剂。不过这个提取抗原可能最后要求的细胞密度不那么大，也可以忽略那些个水解酶吧～

momoenn

回复 baby00000003 的帖子
* |/ b$ }4 D, a  l
2 \7 R% u% z  `: ]7 S或者，有没有更好的办法让俺学习一下

momoenn

回复 lgfffancy 的帖子& p# |4 h  V' Y3 t4 g- l( j8 W

" [2 d! C  k3 A6 r) W# E昂，得到肿瘤细胞后再反复冻融得到肿瘤抗原

momoenn

回复 baby00000003 的帖子
; f* ^7 j7 Y5 W
  \( k% k: L2 {+ k+ e0 o中间有一步关键的步骤，是水浴灭活，应该是灭活的酶的活性。如果直接磨碎反复冻融的话，是不是可能会把目的蛋白给消化了。

baby00000003

回复 momoenn 的帖子
. |/ `1 `6 D* G$ ]* h8 m  `3 I: ]3 Z/ w7 U7 M8 W3 e( n1 T
总之是要破碎细胞获得可溶蛋白呗～' F  _& _! v! j
干脆就操作的时候小心点别污染，给它磨碎了直接反复冻融吧，最后离心的时候，大块和难容碎片也就离掉了
9 ?3 b4 e& h, |1 S% ZBCA测测蛋白浓度，调整一下初始的组织块大小，也就O了吧～

lgfffancy

目前看，你这种方法你是想获得肿瘤细胞吧

momoenn

回复 baby00000003 的帖子
  u8 u! o/ J: v' H. g8 p: O
: x5 ~2 s; ]  z3 e研磨得到肿瘤细胞的单细胞悬液，再经42°和60°灭活。然后反复冻融得到肿瘤抗原。但是现在研磨后的液体看不到细胞形态。离心后颜色还特别红

momoenn

回复 shunho-cell 的帖子$ x! o7 S' M& f" D% \+ k& [2 A+ E

4 d8 _; j6 U  E3 i6 h$ G8 Z- L研磨后应该得到肿瘤细胞的单细胞悬液，现在显微镜下基本观察不到细胞形态。离心得到的沉淀为什么是红色的呢？

momoenn

回复 baby00000003 的帖子
% b+ h  T0 X0 o; e
# p! i# q2 J6 d, ]2 Q- k: G我现在还没处理完，后续还应该进行反复冻融，然后离心取上清得到最后产物。只是感觉现在状态不太对。