求救：冻存后间充质干细胞不贴壁也不是死细胞

chslyx

年前收了一些干细胞，用90%血清+10%DMSO的-80冰箱冻存了一个月，取出后清洗三遍，之后就是细胞就是不贴壁也不死，求救各位大虾

meredith603

不死也扔了吧，至少是状态很不好了。-80度放一个月有点久，尤其是如果是公共冰箱经常被打开的话，没准温度忽上忽下已经很多次了。-80度放个一两天还是快点进液氮才靠得住。

Jump

加细胞因子试试

duwenjing

你的这个细胞状态很不好了，你可以尝试着收集未贴壁的细胞（离心）重新接种，如果还不好的话建议放弃。

chslyx

回复 biluolinyu 的帖子: T( S( z% S& t# g8 |

' H1 M: X$ G6 m# }9 T血清和培养基都是一样的

chslyx

回复 biovictor 的帖子. Y0 Q0 U* U  M. @/ h& E  Y
0 x/ l6 ]; C+ W+ x! j; S: `
染色后都没有死! |$ g2 Y3 w6 s5 [7 ~! I9 @

biovictor

回复 chslyx 的帖子
6 C6 c# F, c* W" D4 @
: D# q& s4 p4 w1 s, q楼主，做个PI染色就知道是不是死的了！很简单

biluolinyu

血清和冻存之前的尽量保持一致，另外不贴壁估计细胞也快不行了吧。。。

saliai2016

不贴壁的话应该是死了吧

abcstem

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" [: |3 J6 h1 M0 B9 n3 z确定培养条件和冻存前一样吗？试剂是否有换过？这种情况我觉得应该是培养液的问题，重新配培养液吧。