CAR-T细胞转染请教

六弦七品

MOI低了转不进去，高了细胞又挂，大神们是如何解决这个问题的？

拉二胡的拉尔夫

1.逆转录病毒:优点：转导效率高。缺点：有引起插入致瘤的风险，不能感染非分裂细胞，病毒滴度低
) }( m4 l  A) _3 m2.慢病毒：优点：转导效率高，可转染分裂细胞和非分裂细胞，长期稳定的基因表达。缺点：成本高
0 I. \% \. @0 F' G* }3 `3. RNA电穿孔：缺点：瞬时表达（<1周），需反复注射

riverdtang

慢病毒，超离浓缩到8次方以上滴度，加polybrene，T细胞分离24-28h转，有50%转染率

ET生物人

回复 riverdtang 的帖子1 p5 K1 z. h5 q) `0 _- Q7 U
7 s2 @- G: H# X# X! |( I
T细胞分离24-28h转   请问 这是什么意思？？

riverdtang

回复 ET生物人 的帖子! D; D2 n1 e# J  r% s( b- j/ \
% n2 b% s+ i& ~: K$ Q
分离后48小时转，效率高些

ET生物人

回复 riverdtang 的帖子4 ?) O( I5 `0 {; x4 Y
% O' Z3 _1 \' D: b1 G* V
你是用什么培养基的？？我们用了好多方法，发现转染效率很不稳定 不知道是哪里出问题

riverdtang

回复 ET生物人 的帖子' U( x2 b2 i- j0 Q0 B5 {' t
. F) J: q3 j' A1 c4 ~
takara，美天旎，lonza等养T细胞的培养基都可以，感觉培养基对转染率并没有太大影响

biluolinyu

转染不加血浆和抗生素算不算？

ET生物人

回复 riverdtang 的帖子
* ^% z% v; c9 O  g
  R, H1 B* H' L( X9 I2 H5 F' [那你觉得感染率是跟什么有影响？

lgfffancy

回复 biluolinyu 的帖子* W% e( Z+ R( ~, L7 C
  k1 Y. q6 Q' I$ ]0 _
transfection的时候最好不要加抗生素，提高转染效率