CAR-T细胞培养中慢病毒转染的问题

木子小王令

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是的，感觉自己还是操作有问题。9 [- ]* X7 ]1 c. ^6 D
是别人给的培养第九天的Tcell，我每孔取了3×105接的。因为以前慢病毒转染时候一般都是在转染时细胞汇合度达30~50%，所以这回转Tcell也想当然的沿用这个规律。( h9 z6 E6 S8 k7 L3 e# I3 @

5 R9 Z. J. T7 C+ C  ?请问你是在Tcell初始分离后就开始用抗体刺激吗？是不是这个时期的Tcell活力比较高呢？（我之前用的Tcell是不是有点老了？）
+ J" T) i% v" w: k
1 Y  v3 w0 I1 \" {铺板密度如果是10^6/ml，6孔板铺1ml就可以的吧？接种第二天做转染，然后24h后再换液？' M' w+ C! H4 |+ B( S1 |

yanxm920

没有遇到过呢

riverdtang

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& ~7 x: U9 d1 F, JT细胞分离后用抗体刺激48h转，MOI：10-50我们的转染率就很高了，50%以上吧，感染第二天换液，铺板密度10^6/ml都可以，我觉得可能还是细胞激活的问题

木子小王令

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你好！我是刚接触慢病毒转Tcell的实验，请问初始摸索的过程中，一般慢病毒转染Tell的时机，细胞接种量，MOI可以设定多大的梯度范围呢？我试过一次，Tell接到6孔板中是3×10^5/well，MOI为200，作用时间48h都没有换液，细胞状态还是很好，但是转染效率很低，不足10%的样子。

ET生物人

慢慢发现，不同人的T细胞感染效率差异有点大！！你们做的T细胞是来自哪里？来源稳定吗？

riverdtang

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T细胞可比293T难转多了，293T只要活着、状态不差，都能转进去的，T细胞分离后转染的时机，MOI，刺激的条件都很重要，建议你还是用GFP病毒转一下T细胞，优化T细胞本身的转染效率再转CAR

六弦七品

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6 z2 D  b9 v1 z3 d, K我们转T细胞的同时转293T，293T是可以检测到CAR的，T细胞检测不到，现在不知道问题出在哪

riverdtang

你是CART转不进去还是病毒转不进去， 如果只是CART的话要考虑载体和病毒的问题，比如启动子啊，滴度，转染时机等，如果对照GFP都转不进去的话可能就是体系或者细胞的问题了

winqi

polybrene 肯定有毒性的，而且毒性还比较的大，需要换，你用的cmv还ef-1a作启动子啊？这两个可能有不同！

六弦七品

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没用增强剂，有人说是慢病毒的VSVG蛋白对细胞有毒性，做过的人有遇到类似情况吗？