CAR-T细胞培养中慢病毒转染的问题

木子小王令

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! `0 y$ [- y0 C( u& ^3 |你好！我是刚接触慢病毒转Tcell的实验，请问初始摸索的过程中，一般慢病毒转染Tell的时机，细胞接种量，MOI可以设定多大的梯度范围呢？我试过一次，Tell接到6孔板中是3×10^5/well，MOI为200，作用时间48h都没有换液，细胞状态还是很好，但是转染效率很低，不足10%的样子。

木子小王令

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是的，感觉自己还是操作有问题。7 d$ U( F( f7 ?( X4 @- F7 Z+ L* Z
是别人给的培养第九天的Tcell，我每孔取了3×105接的。因为以前慢病毒转染时候一般都是在转染时细胞汇合度达30~50%，所以这回转Tcell也想当然的沿用这个规律。/ D. A. E, T3 ~7 V6 M( }2 `
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请问你是在Tcell初始分离后就开始用抗体刺激吗？是不是这个时期的Tcell活力比较高呢？（我之前用的Tcell是不是有点老了？）
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5 _# A  y. e9 Q3 i4 c# F铺板密度如果是10^6/ml，6孔板铺1ml就可以的吧？接种第二天做转染，然后24h后再换液？6 l& N+ Q! P2 ?: N) @# j* D

木子小王令

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3 }2 L5 G: J0 J1 p; n( R恩恩！谢谢大神！: p1 l$ w2 _' Z# p, W
我下次试着做个梯度，有问题还请多多指教！！！