CAR-T细胞培养中慢病毒转染的问题

riverdtang

你是CART转不进去还是病毒转不进去， 如果只是CART的话要考虑载体和病毒的问题，比如启动子啊，滴度，转染时机等，如果对照GFP都转不进去的话可能就是体系或者细胞的问题了

riverdtang

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9 u' k. d) g9 f: f$ x8 d" [
, V' }+ C4 D/ ~, Q' R) mT细胞可比293T难转多了，293T只要活着、状态不差，都能转进去的，T细胞分离后转染的时机，MOI，刺激的条件都很重要，建议你还是用GFP病毒转一下T细胞，优化T细胞本身的转染效率再转CAR

riverdtang

回复 木子小王令 的帖子2 [6 g9 K" i  t! Q; ~" B3 k. T
7 K7 D1 C4 R6 G+ {" E; E" C  b
T细胞分离后用抗体刺激48h转，MOI：10-50我们的转染率就很高了，50%以上吧，感染第二天换液，铺板密度10^6/ml都可以，我觉得可能还是细胞激活的问题

riverdtang

回复 木子小王令 的帖子  @3 [. \) E* q4 l1 l. J' y

+ i) D$ @/ h* l是的，第九天转那效率肯定不会很高的，我们分离就刺激，浓度看你们所需的细胞种类和抗体质量了，这个需要摸索一下，不过你们可以长到第九天还有10%转染率，那刺激可能不是最大的问题，你可以试下分离2-3天转，可能会好些。悬浮细胞不需要铺板啊，直接转就是了，第二天换液。

riverdtang

回复 六弦七品 的帖子( K$ \9 n9 a3 Q: m! Q4 v

' I. X& Y: g1 O+ O* u' Y7 i启动子试过没有什么明显的差别，还是转染时机影响吧，分离激活后尽早转会好些