CAR-T细胞培养中慢病毒转染的问题

木子小王令

回复 riverdtang 的帖子" K" J: m) j+ N" X
" O! @  d7 R. r* e! ^  p
你好！我是刚接触慢病毒转Tcell的实验，请问初始摸索的过程中，一般慢病毒转染Tell的时机，细胞接种量，MOI可以设定多大的梯度范围呢？我试过一次，Tell接到6孔板中是3×10^5/well，MOI为200，作用时间48h都没有换液，细胞状态还是很好，但是转染效率很低，不足10%的样子。

木子小王令

回复 riverdtang 的帖子
/ A. \; E8 @( y, b5 j" e
) H) |5 ]( w# @5 x! x( c是的，感觉自己还是操作有问题。2 l- u% }' o1 y2 U
是别人给的培养第九天的Tcell，我每孔取了3×105接的。因为以前慢病毒转染时候一般都是在转染时细胞汇合度达30~50%，所以这回转Tcell也想当然的沿用这个规律。
5 G1 a) g  K+ U6 W0 ]# ~+ b- @5 \. o$ w1 P9 ~
请问你是在Tcell初始分离后就开始用抗体刺激吗？是不是这个时期的Tcell活力比较高呢？（我之前用的Tcell是不是有点老了？）% h8 I  U9 |" d: P7 Q2 x) ?1 u* V

9 l, @( @. b" l/ N  x% g铺板密度如果是10^6/ml，6孔板铺1ml就可以的吧？接种第二天做转染，然后24h后再换液？
  E: R$ L$ Z+ w8 k' ^! w8 U$ E+ G

木子小王令

回复 riverdtang 的帖子
, j: ]* L1 ~, s. R) x1 C
8 K4 C% Z! f5 t2 R4 ], S恩恩！谢谢大神！
& i+ q" I( G/ j* @& P" X7 }我下次试着做个梯度，有问题还请多多指教！！！