内皮祖细胞的分离

coffee.cat105

内皮祖啊，你要先搞清楚自己想要的到底是会生长会成血管的那种呢，还是不长的那种，不然很容易坑…………

coffee.cat105

: M* P" O  `$ Q) p  G/ \
  Y1 \" g* q5 g. t( N% U
/ ?0 q" M' @9 c8 X' n8 F
这个简单啊，我们做就下面几步
" F) s$ ?: V' m$ L: ]1] Fibronectin铺6孔板，过夜; N- p: `" P* w
2] 新鲜血20ml，ficoll分离脐血单个核细胞，200gX5min，洗涤细胞1次，EGM-2培养基重悬。
! V4 Y- d7 i& ]& U; j( S3] 1X107/cm2密度将细胞接种到铺好Fibronectin的6孔板中，37℃、5%CO2条件下培养。
1 D/ @- t6 o1 S& @6 q: S细胞培养24h后换液，之后3d换液一次。7 m: ?+ }/ M0 {/ g+ E. R, I% m- F; A
4] 7-10天形成铺路石样克隆，基本每孔都有1-2个，差不多就正常传代就可以了。
% W# ]7 I9 [, N" D5]1传3的密度传，大概也就３天长满的样子
# p% k2 ?7 ~/ l$ I  k0 i没了，很容易的2 J: j; u# N1 k3 S
不要用瓶，瓶容易坑
* q9 B1 A( h' e8 r6 c不要用羟乙基淀粉分离单个核，容易不贴壁: q# N! e6 [- ?
培养基用lonza的EGM-2就可以，EGM-2mv也行，只要看你下面的实验，在长出来这一步没有区别
2 Z6 ^8 q* ^! S7 D4 i* Y, `4代之内成血管都不会有太大问题，4代以后成的血管就可能会不太好看