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wuhuaguo88l

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楼主

发表于 2016-4-11 19:16 |显示全部帖子

用染料法做QPCR，需要看溶解曲线，你是绝对定量还是相对定量，实验目的是确定基因的拷贝数还是表达量，没有交代清楚

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wuhuaguo88l

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沙发

发表于 2016-4-12 10:46 |显示全部帖子

溶解曲线还不错，引物应该还可以。如果是扩增曲线感觉不好，有问题的话，可以将样本10倍往下稀释成3-4个梯度，然后做QPCR，类似于绝对定量，看一下扩增效率怎么样，内参也要用相同方法测一下，若是扩增效率在1.9-2.1之间，实验结果是可信的。

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藤椅

发表于 2016-4-12 12:45 |显示全部帖子

罗氏LC96或LC480只要看一下标准曲线就可以了，我和你其实是一个意思，理论上扩增是2的n次方，实际实验是（1+e）的n次方，e是扩增效率，应该在90%-120%之间是可信的

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