定量试验扩增曲线?

gxbzjznn

同一个基因做了两次定量试验，但扩增曲线为什么差别这么大？哪个好？

gxbzjznn

这是第一做的（用的SYBR酶）

gxbzjznn

这是第二次做的 用的2X Realtime PCR Master Mix做的

wuhuaguo88l

用染料法做QPCR，需要看溶解曲线，你是绝对定量还是相对定量，实验目的是确定基因的拷贝数还是表达量，没有交代清楚

sithbj

同上，对照那???

gxbzjznn

回复 wuhuaguo88l 的帖子+ V& e$ f0 V* {

+ f0 B+ \% G6 C% L相对定量  看基因表达量  内参和溶解曲线没放上来

gxbzjznn

回复 sithbj 的帖子0 G$ e' e7 d# J( {  r
  N$ S% G$ U# P* ?1 N3 U
相对定量  看基因表达量  内参和溶解曲线没放上来  我主要想问的是单独从扩增曲线能否看出来扩增效果的好坏？因为试剂商跟我说的是2X Realtime PCR Master Mix是他们从美国哈佛大学实验室分装过来的，效果非常好。。。

gxbzjznn

这是第一次做的熔解曲线

gxbzjznn

回复 gxbzjznn 的帖子
+ U( G9 [, d  _8 c7 N: A" {) Q& ?! Z" L6 S6 N; ]7 O" Y; h5 X0 L
这是第一次做的溶解曲线 第二次做因为是新的试剂（2X) 由于说明书没看明白 可能程序设置错了 只跑出来扩增曲线 没跑出来溶解曲线

sithbj

首先2X的效率低了好多数量级。如果条件类似的话，这是一个失败的反应。实验中可能有一个致命的错误。首先2X，是最后加完引物，样本和水后，正好是1X。其次别忘了引物。第三，这个Dye是什麽，波长要对应。
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英雄重来一遍吧' n" R2 v% q* r: ]. r1 q