定量试验扩增曲线?

gxbzjznn

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逐个回答你的问题：1.条件确定类似（cDNA浓度几乎一致都是按照定量试验要求的在100-200ng/ul、反应体系以及加样顺序全部一致)。 2.引物确定加了的（两次实验用的同一管引物） 3.2X里面的荧光染料也是SYBR GreenI  但是你说的我还是不明白，求指点。。。。

wuhuaguo88l

溶解曲线还不错，引物应该还可以。如果是扩增曲线感觉不好，有问题的话，可以将样本10倍往下稀释成3-4个梯度，然后做QPCR，类似于绝对定量，看一下扩增效率怎么样，内参也要用相同方法测一下，若是扩增效率在1.9-2.1之间，实验结果是可信的。

gxbzjznn

回复 wuhuaguo88l 的帖子, E5 t  s7 A( l3 `$ N, H' Q/ E
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扩增效率怎么计算的？

gxbzjznn

回复 wuhuaguo88l 的帖子8 P0 l2 C+ }( Y2 v
3 x& |  O* r- `( j2 w
我们实验室用的罗氏的仪器，计算出来的扩增效率都是在90%-120%之间，都是用百分比表示的。您说的这个1.9-2.1也是用罗氏的仪器做的吗？

wuhuaguo88l

罗氏LC96或LC480只要看一下标准曲线就可以了，我和你其实是一个意思，理论上扩增是2的n次方，实际实验是（1+e）的n次方，e是扩增效率，应该在90%-120%之间是可信的

gxbzjznn

回复 wuhuaguo88l 的帖子' Y6 M3 z/ r8 i% P

* D. L! B% E; U4 r! `5 W; w对啊 已经根据公式计算过了 80-120%之间都是有效扩增 90-105%是优化扩增 我们的这个扩增效率都是在90-105%没有问题 而且标准曲线的回归系数都是大于0.99  就是不知道问题出在哪里了