［求助］关于DC细胞培养问题

nailute1985

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各位吧友，想请教一下，我用复苏后的PBMC常规培养DC，PBMC总数2*10的7，接种密度2*10的6/ml于T75，培养基vivo15+0.5%HSA＋1%自体血浆，贴壁2h之后，PBS润洗一次，去除未贴壁的细胞，加GM-CSF 1000U/ml、IL4 1000U/ml，培养过夜之后发现细胞绝大部分都飘了，但是前一天镜下观察细胞贴壁贴的非常非常牢，不知道有谁遇到过这种问题么？是冻存的PBMC的问题还是别的问题呢？望赐教～PS：冻存的PBMC是健康人脐带血分离得到。

hahawang303

我觉得有可能存在问题的一是冻存PBMC的问题，你可以用新鲜的PBMC来做一次实验就可以证明；二是T75的瓶子，比如康宁的瓶子就有两种类型，瓶内壁经过处理的和没有处理的，分别适用于培养悬浮细胞和贴壁细胞的，你看看是不是有问题，或者你用6孔板养一下也可以对照证明一下。我们养DC的时候不加HSA的。

lele

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" _# R5 m2 L3 ^, i. Z5 X
, |+ E; p6 u# M9 t6 Y6 J: y如果你尝试过新鲜脐带血培养，没有问题，那么多半是冻存的问题了，你有计算复苏时活率吗？有时复苏当天看着很好，高倍镜下看有很多细胞已破裂。建议做个对比试验吧。

奇幻雪蓝

请问HSA是什么？

奇幻雪蓝

请问HSA是什么？

鸵鸵

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人血清白蛋白

奇幻雪蓝

回复 鸵鸵 的帖子; z/ L' g1 j) r
! c. H; ?5 q& b: U( X! b
谢谢！

nailute1985

回复 lele 的帖子1 n; a9 U' v/ K+ N

9 L" m- `6 z) P% V. r0 K: }& v6 H复苏后的状态很好，活率98%左右。其实不是细胞状态的问题，是应该贴壁反而飘了。。

nailute1985

回复 hahawang303 的帖子% m1 _& R2 f7 i9 Y

. k# A8 V9 x2 R7 d7 m$ F是，但是第一天贴壁贴的非常牢，第二天飘起来这就有点诡异了……如果是瓶子的问题，第一天贴壁就应该不好才对。。

hahawang303

回复 nailute1985 的帖子' I. o9 u2 Y- D$ e
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养细胞的过程中有些问题是比较复杂的，你最好是自己多做一下对比试验吧，最后都是可以找到原因的。