成纤维细胞消化

Llxue

昨天皮肤成纤维细胞传代的时候，用胰蛋白酶消化细胞，在显微镜下可见细胞已经形变至球形，只是还未脱落，马上终止消化，可是吹的时候怎么都吹不下来，明明已经消化至形变，为何吹不下来呢？哪位知道，请指点一下啊

splinkerette

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6 G5 s* c# r) k5 ]
. K8 K) S  A9 G, X+ D还是尽量避免直接用胰酶吹打，我的经验是用将培养瓶或者培养皿倾斜，用移液枪吸少量胰酶，在一定高度直接滴到细胞上，肉眼观察细胞是否被这种液滴冲下来。如果没有反应就继续孵育，反之就可以终止了。

swtarron

有两种可能：1、消化时间太短了，如果过多依靠外力使细胞从瓶壁脱落的话，一方面是不好操作，另外一方面细胞容易成团，也吹不散，如果收集细胞（传代、冻存等）之前要过滤的话，成团的细胞会被过滤掉，影响细胞的回收率；2、就是细胞状态不好，细胞长老了，也不容易消化。

Llxue

回复 fuyinsheng 的帖子& T/ l: A9 V. w

4 b+ g$ Y7 i* p6 h3 ?我们都是自己提取的，最多养到P3代就不往后养了，成纤维细胞形态本身较大，但是具体的大小很少有文献报道，只要形态表型正常应该就没问题，另外，我们是用低糖的DMEM养的，一般2-3天就会增殖传代

fuyinsheng

轻轻拍打瓶壁会比较好震荡下来。; ]- m8 I. l% |9 x6 t& d& g+ l7 Y
同时想借助平台问下，我这边采购的皮肤成纤维细胞特别大，而且生长的很慢的用高糖DMSM加15%FBS养的，6-7天都长不满，采购来的时候是P4-P5代，请问有没有比较了解人皮肤成纤维细胞培养的，我想咨询下这个细胞一般能传多少代，是不是本身就很大，并不是因为老化才变大的。

Llxue

回复 yaolinzhang 的帖子, f9 D, [( i  W" j- o9 @
+ K! _* L) x2 u* M/ \8 g) t
好的，下次试试

yaolinzhang

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" G$ h3 c# H8 U7 w) y; K' z+ H8 n; p* |
没你想象的那么严重，你可以试试

Llxue

回复 yaolinzhang 的帖子
. c" X( M7 w7 a% J3 N
* a" ]+ \% o" h" C: p' D" W8 p7 y& T胰蛋白酶再吹打对细胞损伤应该挺大吧

yaolinzhang

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) X) R% S, U  _  x/ u* Q0 W5 [9 S
3 X: G7 r6 _5 @, s" _3 C其实你可以先用胰蛋白酶吹打细胞，待其脱落后再加培养液终止消化

Llxue

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1 p& q( {, f; k' H% O; ]4 e4 U/ \# U3 }7 P) S( r
嗯，就是怕影响细胞活性才尽快终止的