成纤维细胞消化

Llxue

昨天皮肤成纤维细胞传代的时候，用胰蛋白酶消化细胞，在显微镜下可见细胞已经形变至球形，只是还未脱落，马上终止消化，可是吹的时候怎么都吹不下来，明明已经消化至形变，为何吹不下来呢？哪位知道，请指点一下啊

2357710447

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& s" h1 f1 c- @* l1 r+ A% Y2 w消化的时候你需要用手轻微拍打瓶壁   看到细胞脱落了就可以   边拍打边在显微镜下面观察    不要让他一直静置让姨酶消化   姨酶对细胞是有损害的   时间一般不要超过两分钟    否则你计数出来细胞活率会降低（死细胞太多）    对细胞的影响很大

Llxue

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嗯，就是怕影响细胞活性才尽快终止的

yaolinzhang

回复 Llxue 的帖子. s$ H1 r' ]7 H: Z  O
  [+ N3 x4 W* {1 O
其实你可以先用胰蛋白酶吹打细胞，待其脱落后再加培养液终止消化

Llxue

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) g* o, F& o! p4 A- \3 v# ^) {胰蛋白酶再吹打对细胞损伤应该挺大吧

yaolinzhang

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: y- B0 t. E- `# K1 i+ h0 M( h3 V
没你想象的那么严重，你可以试试

Llxue

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4 D0 Z& ~' T7 h+ N3 S
好的，下次试试

fuyinsheng

轻轻拍打瓶壁会比较好震荡下来。
( F6 B  n% i" M0 q/ G9 U$ Y同时想借助平台问下，我这边采购的皮肤成纤维细胞特别大，而且生长的很慢的用高糖DMSM加15%FBS养的，6-7天都长不满，采购来的时候是P4-P5代，请问有没有比较了解人皮肤成纤维细胞培养的，我想咨询下这个细胞一般能传多少代，是不是本身就很大，并不是因为老化才变大的。

Llxue

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) C% _3 u" w7 q  j2 u0 k
9 l1 H( l, i' K; ]# h我们都是自己提取的，最多养到P3代就不往后养了，成纤维细胞形态本身较大，但是具体的大小很少有文献报道，只要形态表型正常应该就没问题，另外，我们是用低糖的DMEM养的，一般2-3天就会增殖传代

swtarron

有两种可能：1、消化时间太短了，如果过多依靠外力使细胞从瓶壁脱落的话，一方面是不好操作，另外一方面细胞容易成团，也吹不散，如果收集细胞（传代、冻存等）之前要过滤的话，成团的细胞会被过滤掉，影响细胞的回收率；2、就是细胞状态不好，细胞长老了，也不容易消化。