求助各位亲，PBMC分离出来红细胞过多，如何再尽量PBMC损失最少的情况下减少红细胞呢？

xiepu1

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0 k3 ^1 ]( Z2 S2 _! b  C1 {首先血液质量要好，样品到后要立马开始处理，
$ ]0 N7 y" C$ N其次血样尽量做到1:1稀释或大于，
) z0 `5 M, o- |: @! _" l& r# u最后血样铺成要先慢后快，铺样过程要均匀

伊诺强

几个注意点：一、ficoll管使用前离心；
3 J1 f2 f$ N3 ^  y$ n* r; M            二、血液到了后需混匀，再轻轻地转移到ficoll上，一定要轻！每管的血液添加量不要过多，一般不要超过ficoll量，或者更少；
$ f) @& y8 v0 N            三、如遇到已有溶血现象，可用生理盐水或PBS二倍稀释后再转至ficoll上；. C/ u: M: c2 L3 i0 w/ O* S
            四、提取PBMC时一定要稳、准、狠，争取一次性连续的取完，血浆可以多保留些，血浆中也有部分PBMC。
# ?! ~, {1 j1 R/ [% T            五、因为不知道您具体要洗几次，所以建议可以适当增加合适的离心梯度。
) _3 C5 C: Z% V1 f; Q: q7 _. w/ R            另外，目前有成品分离管，分离效果还不错，PBMC收集率挺高的，但是也要注意加血时要轻。希望能帮到您！

Liyun65

小心操作还是很好分离的，有少量的红细胞应该是没有关系的。
  j# L- f# |2 ?! @: J4 \/ U- u# T要分离的血液要新鲜，放置几分钟到室温。分离液也要提前从冰箱拿出来，放置到室温。还要注意分离液和血液的比例。加入血液时注意分层界面要清晰。离心注意缓升缓降就好。

生物太次郎87

①样品质量。血液样品要新鲜，有一点点凝血分离出的效果就不太好。②分离液的质量。我们公司淋巴细胞分离液都是自己配的，分离效果不太好。一般都是分离2次，第一次用50ml离心管（装20ml分离液）。第二次用15ml离心管（装5ml分离液）。③离心条件。条件不合适，白细胞损失就比较多。其实红细胞多也没事，我养悬浮细胞，红细胞多，连红细胞裂解液都不用，哈哈，直接传代到100ml体积时，半量换液，之后越来越好养了。有需要交流，可进一步讨论。

zhouweixing000

首先一点你实验室要有一套成熟的实验方案，
- U" j  z' P1 Y* z再有就是把每一步的试剂特性把握好，
/ a, f1 S7 b7 C再有就是个人的操作水平了，1 v  _* f  c( K6 M6 m/ G1 f
在一个试验中这三点你要都做好了，
* }/ ?+ L5 j$ T) u! n实验结果自然就比较理想了。

拉二胡的拉尔夫

1.采血以后，一定要用生理盐水充分稀释。5 O& {: l5 ~9 w# m
2.注意ficoll的离心转速，降速一定要慢。
: V# X( ?7 S0 D; F3 p7 e' n3.吸白膜层的时候一定小心不要插入过深。
* v: y% _' _; x4.以上都不行可以试试磁珠分选。$ l0 k0 Z3 O# B7 w( s
5.其实有点红细胞问题不大，有文章还报道过，红细胞还能促进免疫细胞成熟和增殖。

LVXUEYAN1101

PBMC分离的时候FICOLL和离心条件很重要。首先FICOLL品牌很重要，其次使用之前最好室温预热；离心的时候升降速一定要调节好

biluolinyu

ge的ficoll效果确实很好
: M; J( _- f- v& Kficoll分离的时候一定要注意离心条件，离心条件的差别会影响分离效果

nailute1985

回复 stella2015 的帖子' @  C- t: L% K1 _

: k5 M# c5 A* U3 D4 h) I2 @* aGE life science的ficoll分离效果不错，但是就是贵。