求助各位亲，PBMC分离出来红细胞过多，如何再尽量PBMC损失最少的情况下减少红细胞呢？

stella2015

各位亲友们，求助一下，有没有其他相对好的办法使得PBMC损失最少，而红细胞能尽量清除掉，不影响PBMC的培养，红细胞裂解液是一个方法，有使用过的亲能推荐一下好的品牌吗？？谢谢！~~~~

nailute1985

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  Q2 O( J; f% K0 ?$ L+ Q- j- O8 r4 b; t1 F
GE life science的ficoll分离效果不错，但是就是贵。

biluolinyu

ge的ficoll效果确实很好
6 l. S# J0 j0 k8 N3 U! A4 dficoll分离的时候一定要注意离心条件，离心条件的差别会影响分离效果

LVXUEYAN1101

PBMC分离的时候FICOLL和离心条件很重要。首先FICOLL品牌很重要，其次使用之前最好室温预热；离心的时候升降速一定要调节好

拉二胡的拉尔夫

1.采血以后，一定要用生理盐水充分稀释。# {8 x' h0 c' R" ^
2.注意ficoll的离心转速，降速一定要慢。
$ q. j, Z; T! G' h* j( Q6 H3.吸白膜层的时候一定小心不要插入过深。6 G2 O6 n9 t$ s* ?  ?2 E# P1 q- F
4.以上都不行可以试试磁珠分选。
* T2 l4 D, F8 Y, b; H; O- r5.其实有点红细胞问题不大，有文章还报道过，红细胞还能促进免疫细胞成熟和增殖。

zhouweixing000

首先一点你实验室要有一套成熟的实验方案，$ z4 r& F+ s' g# S. L1 V6 T( w7 U, w* G
再有就是把每一步的试剂特性把握好，+ D  ^: X& ^4 r" Y* o( x
再有就是个人的操作水平了，
1 {4 r( f/ P; x) p. N在一个试验中这三点你要都做好了，! z$ `4 u: i  K# B7 d
实验结果自然就比较理想了。

生物太次郎87

①样品质量。血液样品要新鲜，有一点点凝血分离出的效果就不太好。②分离液的质量。我们公司淋巴细胞分离液都是自己配的，分离效果不太好。一般都是分离2次，第一次用50ml离心管（装20ml分离液）。第二次用15ml离心管（装5ml分离液）。③离心条件。条件不合适，白细胞损失就比较多。其实红细胞多也没事，我养悬浮细胞，红细胞多，连红细胞裂解液都不用，哈哈，直接传代到100ml体积时，半量换液，之后越来越好养了。有需要交流，可进一步讨论。

Liyun65

小心操作还是很好分离的，有少量的红细胞应该是没有关系的。
* x8 g# x9 ]8 v: ?4 D8 q要分离的血液要新鲜，放置几分钟到室温。分离液也要提前从冰箱拿出来，放置到室温。还要注意分离液和血液的比例。加入血液时注意分层界面要清晰。离心注意缓升缓降就好。

伊诺强

几个注意点：一、ficoll管使用前离心；
* P& [+ @5 U  j$ N; p            二、血液到了后需混匀，再轻轻地转移到ficoll上，一定要轻！每管的血液添加量不要过多，一般不要超过ficoll量，或者更少；
' m; y5 B' E6 K4 B            三、如遇到已有溶血现象，可用生理盐水或PBS二倍稀释后再转至ficoll上；% D# R" h; e8 @3 W3 t
            四、提取PBMC时一定要稳、准、狠，争取一次性连续的取完，血浆可以多保留些，血浆中也有部分PBMC。
1 m. O. h# p0 }5 U7 O  P% C5 V# L  b            五、因为不知道您具体要洗几次，所以建议可以适当增加合适的离心梯度。
) w' o- p! W1 N/ f5 H; R8 w: J* R            另外，目前有成品分离管，分离效果还不错，PBMC收集率挺高的，但是也要注意加血时要轻。希望能帮到您！

xiepu1

5 {" W( U* P4 A; R  R: A& A  x
/ O5 H- _. H$ k7 [* X
首先血液质量要好，样品到后要立马开始处理，
7 q% M* ]  ?; J3 M6 }. x7 ?. }: [其次血样尽量做到1:1稀释或大于，
. e# j- M/ E# Z9 Q' u最后血样铺成要先慢后快，铺样过程要均匀