小鼠脂肪间充质干细胞

sports123

求问，有没有人做过小鼠脂肪间充质干细胞提取的。
' d( `5 Z4 @5 o) D* u我们的方案如下，3 r- `1 _: j9 F1 A) ?. N( m
将脂肪组织剪碎， 用含有双抗的 PBS 充分冲洗干净； 添加胶原酶， 在 37℃水浴箱中孵育 30—90min， 加入胎牛血清终止消化； 离心后通过 400μm的细胞筛， 过滤掉未消化的部2 G1 f0 d( r$ d5 L0 j, l
分， 然后低速离心； 离心后试管中的沉淀既离心后试管中的沉淀即 SVF。 SVF 是一种由多种细胞组成的细胞群， 包括循环血细胞、成纤维细胞、周细胞、内皮细胞和 ASCs等；将 SVF 在红细胞裂解液中冰上孵育 10min， 用含有双抗的 PBS 冲洗， 离心后接种到条件培养基中培养。 在条件培养基中粘附性细胞群即 脂肪间充质干细胞。我们用这种方法，培育一段时间后，发现细胞的数量好少啊！！求问，该怎么解决。

zwlcxx

充分清洗并剪碎组织后，低速离心后弃上清，沉淀加等体积胶原酶，震动水浴1小时。用少量血清终止消化，低速离心，沉淀可直接用培养基重悬后接种。（培养瓶可以用血清包被6小时以上，使用前用培养液洗两遍）

sports123

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请问，你们震动水浴1小时，温度是37摄氏度吗？还有低速离心的转速是1000转/min吗？养细胞新手，请多多赐教》