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[讨论] 实验室常用的细胞冻存和复苏方法 [复制链接]

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发表于 2009-6-8 14:51 |显示全部帖子 |倒序浏览 |打印
冻存方法2 s1 `& w' q/ a$ S

! v8 w4 y6 j- D* A1.细胞:选对数生长期细胞,收集细胞24小时前换液一次。! G6 ]7 C" T& v; U8 X" P6 H: I# v
2 K6 T2 R% v* J( M1 s* s' y
2.计数:按常规方法把细胞制成细胞悬液,计数,令细胞密度达5×106/ml,离心去上清,吸入离心管中。2 f4 L: h' @7 a! u% T# ]! V& z

) a# H5 O6 ]! J' d- ~3.冻存液:先用培养液9分+DMSO 1分(或甘油)配成10%的DMSO冻存液,按上法一滴滴加入离心管中,然后用吸管轻轻吹打令细胞重悬。
( {8 _$ z/ t& s) F" ?4 m) ~8 ~. M$ c" p+ Y* t* U# z
4.分装:分装入无菌安剖中,每安剖加1.5毫升细胞悬液。. @- v6 q( p! ?$ T4 N/ D- |$ }
) G; H4 x9 a, p3 R3 e; L
5.封口:用塑料安剖时拧紧瓶口即可;如用火焰封闭安剖口后,仔细检查,定要封严,必要时可浸入蓝色液中观察,为安全起见,把安剖缝入纱布小袋中,以防液氮浸入后,融解时因受热发生爆炸伤人;纱袋一端系以线绳,末端扎有小牌,注明:细胞名称,冻存日期,以便日后查找。4 a& o& X8 X% N

' f2 c* V- x5 }3 @/ u7 k/ A 复苏方法3 x( d% K  o/ q
+ H1 p8 w- L5 t6 A/ a7 n8 L1 v' s
1.从液氮罐中取出安剖;有时因安剖未封严,浸入了液氮,取出后因安剖内液氮迅速气化而发生爆炸,因此应带有防护眼睛和手套。$ q+ R( n5 P- I- \
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2.迅速放入盛有36℃~37℃水的搪瓷罐中,扣上盖并不时摇动,尽快解冻。
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" R. H! A1 u/ }$ C( S7 h3.剪开纱布口袋,取出安剖,用70%酒精擦拭消毒后,净化台上打开盖,用吸管吸出细胞悬液,装入离心管中,再补加10ml培养液,吹打使细胞悬浮。
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5 P9 R& N/ S; g) Q3 T4.低速离心(500~1000转/分)5分钟,取上清后再重复用培养液漂洗、离心。/ V7 Z. a& y1 x9 z/ i8 h) Z
3 d3 k4 T% U. e( ~+ G- A9 Z" b
5.加入培养液适当稀释后,再移装入培养瓶中,置温箱培养,次日更换一次培养液后再继续培养。
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