实验室常用的细胞冻存和复苏方法

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冻存方法
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1．细胞：选对数生长期细胞，收集细胞24小时前换液一次。
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, U$ i2 g6 i. H" ~9 i( G2．计数：按常规方法把细胞制成细胞悬液，计数，令细胞密度达5×106/ml，离心去上清，吸入离心管中。
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3．冻存液：先用培养液9分＋DMSO 1分（或甘油）配成10％的DMSO冻存液，按上法一滴滴加入离心管中，然后用吸管轻轻吹打令细胞重悬。6 t1 o$ t: S7 |5 N$ e0 d

) G+ j, j) S9 ^# U4．分装：分装入无菌安剖中，每安剖加1.5毫升细胞悬液。
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# J. L& A6 e+ m( \5．封口：用塑料安剖时拧紧瓶口即可；如用火焰封闭安剖口后，仔细检查，定要封严，必要时可浸入蓝色液中观察，为安全起见，把安剖缝入纱布小袋中，以防液氮浸入后，融解时因受热发生爆炸伤人；纱袋一端系以线绳，末端扎有小牌，注明：细胞名称，冻存日期，以便日后查找。' R6 G. v& j0 a7 o0 o: Y
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复苏方法2 W* c. w  F  f. X
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1．从液氮罐中取出安剖；有时因安剖未封严，浸入了液氮，取出后因安剖内液氮迅速气化而发生爆炸，因此应带有防护眼睛和手套。9 K$ N% g* }! Q$ U9 |

# ^- U+ |# P, t3 \- z- q& b' t2．迅速放入盛有36℃～37℃水的搪瓷罐中，扣上盖并不时摇动，尽快解冻。/ n: B! C$ v6 I# B$ K

- {! f3 l6 G. Z  f" R8 h& I2 Z3．剪开纱布口袋，取出安剖，用70％酒精擦拭消毒后，净化台上打开盖，用吸管吸出细胞悬液，装入离心管中，再补加10ml培养液，吹打使细胞悬浮。
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% J8 Z: k' ?- C" K, A4．低速离心（500～1000转/分）5分钟，取上清后再重复用培养液漂洗、离心。7 q  S5 f, q7 N8 D, ]2 L

; C* q9 X8 `- s9 l" M, i: O5．加入培养液适当稀释后，再移装入培养瓶中，置温箱培养，次日更换一次培养液后再继续培养。