实验室常用的细胞冻存和复苏方法

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冻存方法' ^4 z' i& Z1 n" |3 F- Q/ M) |
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1．细胞：选对数生长期细胞，收集细胞24小时前换液一次。
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. B! \* l/ N# M  b! D2．计数：按常规方法把细胞制成细胞悬液，计数，令细胞密度达5×106/ml，离心去上清，吸入离心管中。% E/ G" n9 T: k0 d8 N! n

6 a0 e3 q; U+ X3 R5 C3．冻存液：先用培养液9分＋DMSO 1分（或甘油）配成10％的DMSO冻存液，按上法一滴滴加入离心管中，然后用吸管轻轻吹打令细胞重悬。9 f' G# [6 {/ |% T6 A6 C" l
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4．分装：分装入无菌安剖中，每安剖加1.5毫升细胞悬液。1 B$ A  h& ]! ?: _) J/ h
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5．封口：用塑料安剖时拧紧瓶口即可；如用火焰封闭安剖口后，仔细检查，定要封严，必要时可浸入蓝色液中观察，为安全起见，把安剖缝入纱布小袋中，以防液氮浸入后，融解时因受热发生爆炸伤人；纱袋一端系以线绳，末端扎有小牌，注明：细胞名称，冻存日期，以便日后查找。9 o7 @( ?% E' B* R/ i

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& w0 |- C5 {8 z. d, c1．从液氮罐中取出安剖；有时因安剖未封严，浸入了液氮，取出后因安剖内液氮迅速气化而发生爆炸，因此应带有防护眼睛和手套。6 S7 O" D) G, C& @4 [) J

8 T3 Y$ b: e0 @& v& Q2．迅速放入盛有36℃～37℃水的搪瓷罐中，扣上盖并不时摇动，尽快解冻。
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3．剪开纱布口袋，取出安剖，用70％酒精擦拭消毒后，净化台上打开盖，用吸管吸出细胞悬液，装入离心管中，再补加10ml培养液，吹打使细胞悬浮。* C5 w1 \- E. X/ l$ K7 [! ?" N

* n- _" |) P- P$ ~8 k) L% j0 L4．低速离心（500～1000转/分）5分钟，取上清后再重复用培养液漂洗、离心。
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* B' s& A. u8 |' H- Z# w) E& ^5．加入培养液适当稀释后，再移装入培养瓶中，置温箱培养，次日更换一次培养液后再继续培养。