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[讨论] 实验室常用的细胞冻存和复苏方法 [复制链接]

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发表于 2009-6-8 14:51 |显示全部帖子 |倒序浏览 |打印
冻存方法' ^4 z' i& Z1 n" |3 F- Q/ M) |
# q) w( P% z' i; r
1.细胞:选对数生长期细胞,收集细胞24小时前换液一次。
8 T0 j: M$ k$ v! b9 r
. B! \* l/ N# M  b! D2.计数:按常规方法把细胞制成细胞悬液,计数,令细胞密度达5×106/ml,离心去上清,吸入离心管中。% E/ G" n9 T: k0 d8 N! n

6 a0 e3 q; U+ X3 R5 C3.冻存液:先用培养液9分+DMSO 1分(或甘油)配成10%的DMSO冻存液,按上法一滴滴加入离心管中,然后用吸管轻轻吹打令细胞重悬。9 f' G# [6 {/ |% T6 A6 C" l
+ W* D) l2 u- S0 B
4.分装:分装入无菌安剖中,每安剖加1.5毫升细胞悬液。1 B$ A  h& ]! ?: _) J/ h
: e3 }0 F* U! x7 S  o+ M
5.封口:用塑料安剖时拧紧瓶口即可;如用火焰封闭安剖口后,仔细检查,定要封严,必要时可浸入蓝色液中观察,为安全起见,把安剖缝入纱布小袋中,以防液氮浸入后,融解时因受热发生爆炸伤人;纱袋一端系以线绳,末端扎有小牌,注明:细胞名称,冻存日期,以便日后查找。9 o7 @( ?% E' B* R/ i

. N! j: N& {( Y7 I" X7 H( i 复苏方法4 v. S  B' Z; x4 G  k% ]  p; |

& w0 |- C5 {8 z. d, c1.从液氮罐中取出安剖;有时因安剖未封严,浸入了液氮,取出后因安剖内液氮迅速气化而发生爆炸,因此应带有防护眼睛和手套。6 S7 O" D) G, C& @4 [) J

8 T3 Y$ b: e0 @& v& Q2.迅速放入盛有36℃~37℃水的搪瓷罐中,扣上盖并不时摇动,尽快解冻。
1 @5 c9 j& m3 m5 B. ^' y6 S+ e- N+ g" `/ K# ^' ?8 n0 `0 E% `: D7 @( m
3.剪开纱布口袋,取出安剖,用70%酒精擦拭消毒后,净化台上打开盖,用吸管吸出细胞悬液,装入离心管中,再补加10ml培养液,吹打使细胞悬浮。* C5 w1 \- E. X/ l$ K7 [! ?" N

* n- _" |) P- P$ ~8 k) L% j0 L4.低速离心(500~1000转/分)5分钟,取上清后再重复用培养液漂洗、离心。
. q: w% u8 P; \0 z
* B' s& A. u8 |' H- Z# w) E& ^5.加入培养液适当稀释后,再移装入培养瓶中,置温箱培养,次日更换一次培养液后再继续培养。
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