实验室常用的细胞冻存和复苏方法

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冻存方法2 s1 `& w' q/ a$ S

! v8 w4 y6 j- D* A1．细胞：选对数生长期细胞，收集细胞24小时前换液一次。! G6 ]7 C" T& v; U8 X" P6 H: I# v
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2．计数：按常规方法把细胞制成细胞悬液，计数，令细胞密度达5×106/ml，离心去上清，吸入离心管中。2 f4 L: h' @7 a! u% T# ]! V& z

) a# H5 O6 ]! J' d- ~3．冻存液：先用培养液9分＋DMSO 1分（或甘油）配成10％的DMSO冻存液，按上法一滴滴加入离心管中，然后用吸管轻轻吹打令细胞重悬。
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4．分装：分装入无菌安剖中，每安剖加1.5毫升细胞悬液。. @- v6 q( p! ?$ T4 N/ D- |$ }
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5．封口：用塑料安剖时拧紧瓶口即可；如用火焰封闭安剖口后，仔细检查，定要封严，必要时可浸入蓝色液中观察，为安全起见，把安剖缝入纱布小袋中，以防液氮浸入后，融解时因受热发生爆炸伤人；纱袋一端系以线绳，末端扎有小牌，注明：细胞名称，冻存日期，以便日后查找。4 a& o& X8 X% N

' f2 c* V- x5 }3 @/ u7 k/ A 复苏方法3 x( d% K  o/ q
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1．从液氮罐中取出安剖；有时因安剖未封严，浸入了液氮，取出后因安剖内液氮迅速气化而发生爆炸，因此应带有防护眼睛和手套。$ q+ R( n5 P- I- \
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2．迅速放入盛有36℃～37℃水的搪瓷罐中，扣上盖并不时摇动，尽快解冻。
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" R. H! A1 u/ }$ C( S7 h3．剪开纱布口袋，取出安剖，用70％酒精擦拭消毒后，净化台上打开盖，用吸管吸出细胞悬液，装入离心管中，再补加10ml培养液，吹打使细胞悬浮。
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5 P9 R& N/ S; g) Q3 T4．低速离心（500～1000转/分）5分钟，取上清后再重复用培养液漂洗、离心。/ V7 Z. a& y1 x9 z/ i8 h) Z
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5．加入培养液适当稀释后，再移装入培养瓶中，置温箱培养，次日更换一次培养液后再继续培养。