求助！牙髓干细胞分离培养总是污染怎么办？

edwardellen

求助各位大神，做牙髓干细胞分离，总是污染，怎么办？
" c4 d. z! M: _- a4 j! L已经尝试了酒精、双抗、碘伏消毒灭菌，但还是总污染。" v2 m7 s8 x* d6 h# d
每次都可以分出细胞来，细胞液贴壁了，但就是污染，简直都被折磨的没脾气了。) |) |( q* h6 k, V7 O% `9 Q
牙齿来源都是医院消毒过后拔下来的，应该是很干净的，操作步骤也都很注意无菌。/ i5 s6 l! J- J1 J( w
但就是会有污染，该用什么消毒清洗剂才能解决呢？
& a1 b6 N6 h( ?" B5 ^; B$ U5 g5 E  m+ w0 R- F, C/ c1 R
不胜感激！

15558156935

好奇用什么工具挤压

vicky406285822

同意清水之殇的说法，先搞清楚污染出现在哪里，用灭菌过的棉签沾上PBS擦拭下牙齿做菌培养；在制备过程中，也可以再取样做一次菌培养，培养过程中再做一次菌培养！

308443730

一、采集的时候要做好充分的清洁消毒，牙齿取下来以后用酒精冲洗然后用生理盐水冲洗 ，防止表面的微生物进入牙髓内；
. P: F* }" j( u8 y- L5 O8 j二、运输的液体里面最好加抗生素，运输的时候加冰块，保证低温，防止细菌繁殖过快；
  @& G8 \: `  a三、处理样本的时候再做一次消毒，最后就是保证处理过程使用的试剂物料都是无菌的，还有无菌操作。

花饶然

1.牙齿表面做好充分清洗，楼上大多数提到的双抗可以用到  t4 o* {) Q+ i5 z" o  v( C7 {9 @
2.牙髓挑出后，再用抗生素溶液作用，这个我就不细说，我们是自己组合的, i% E: q' u8 y# f* |# V2 g
3.消化完毕后，多离心洗涤几次，应该可以除掉很多菌- v: U: }" G/ ]$ U3 e
4.另外是污染的菌主要是什么，这样就考虑你培养过程中是否需要特殊添加何种抗生素

抱朴子

先找一颗无菌的牙（比如经过充分高压）作一对照实验，验证制备和培养过程有无问题。如果没有问题再考虑选牙的问题。

清水之殇

拿过来的牙齿先别急着消毒，用少量生理盐水洗下，把生理盐水做下细菌培养，看看一开始染菌情况。
8 r7 Z  |% T/ {/ y/ H. z2 v+ x培养箱，一些东西彻底清洁消毒下，建议点个酒精灯。  t9 F+ `4 ~6 x1 X3 p0 z1 g0 e
不要想着医院的很干净，其实一般都会有点点染菌，消毒先用盐水洗，酒精消毒，然后盐水洗两遍，在双抗消毒，再盐水洗两遍。

edwardellen

回复 laputa12 的帖子
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如何才能消毒彻底，操作规范呢？还请赐教

laputa12

消毒不彻底啊，操作不规范

rzghc

主要是选材、制备过程、培养过程3个方面