求助！牙髓干细胞分离培养总是污染怎么办？

edwardellen

求助各位大神，做牙髓干细胞分离，总是污染，怎么办？
/ Q/ `" A9 k7 Q已经尝试了酒精、双抗、碘伏消毒灭菌，但还是总污染。8 I5 u2 P3 ?) w
每次都可以分出细胞来，细胞液贴壁了，但就是污染，简直都被折磨的没脾气了。+ |0 |2 O0 u, ?0 f& c4 ]* a* b
牙齿来源都是医院消毒过后拔下来的，应该是很干净的，操作步骤也都很注意无菌。
4 P3 C& M; ]# g$ J( |但就是会有污染，该用什么消毒清洗剂才能解决呢？0 `5 L! E: s# z' S4 B- R# i$ {, N, N

5 X/ R: A1 w* V" q  D9 F; t不胜感激！

免疫与细胞

你要把怎么做的说出来才好分析，不过就现在来看，应该是环境原因，处理过程中动态环境你做过检测吗？

淘知路遥

个人觉得的是样品本来就已经是污染的，牙齿本来就带有很多种微生物，消毒只是片面的，培养起来难度就更大了。

woshibotao_01

1.有可能采集时候就是污染的，只能多洗洗多消毒，龋齿或者结构不完整牙髓暴露的就别做了
6 s5 O2 k0 I7 }0 t) `2 _! b2.操作过程中污染，很多实验室采用劈或者钻的方式，这些方式如果不规范很容易造成二次污染

edwardellen

回复 woshibotao_01 的帖子
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' y0 u2 Q7 c( j一般你们用什么做杀菌消毒？

小云龙

我们也做，好像不是那么复杂，第一看看所取牙齿有没有损坏，最好是品相好的，有的牙齿品相不好也别做，没啥意义。第二不知道你是怎么弄开牙齿的，我们是用挤压获得，然后用酶消化，还有牙齿拿过来没破坏之前做好用75%泡一下，培养的时候加双抗，皿用小皿

wangddk

想比较其他类型的细胞，的确牙髓更易污染。

cellprobe

拔掉的牙齿会泡在有双抗的生理盐水里面，然后用有双抗的生理盐水清洗牙齿至少三次。

edwardellen

看了大家的回答，并没有什么实际的用途啊，该注意的我都注意了。  k$ ^& x0 t* ^; U% ?
或许再深入的细节都算是大家做实验的诀窍，不方便公开吧。

edwardellen

回复 小云龙 的帖子# R, @( [# J4 u9 C$ C
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用什么工具挤压呢？