急求如何从病人的尿液样本中分离，提取尿液上皮细胞的protocol

innatestem

各位大侠们，小弟急需如何从病人的尿液样本分离，提取尿液上皮细胞额实验流程。感激不尽哈~~~! l) K* S$ a" m0 E) ~, s* b

lchanlon

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# v$ e% w" d  Y5 w# B
( Z4 g) e: t- _% ^This paper is talking about how to isolate epithelial cells from urine samples and to generate iPSCs from these epithelial cells. Hope it can help.

innatestem

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- m8 O7 d( f. W8 U' U0 u& ~
谢谢你的分享~

niliu730323143

1.     收集尿液，1000ml左右，当天收集当天离心收集。5 p# ~: w# \4 g" Q, _
2.        1010g离心4min；用多支50ml离心管离心。* c% L. E8 a$ d/ a! z8 b6 t
3.        小心吸掉上清，剩约0.3-0.5ml液体。所有离心管合并一管。
& ^% e9 m8 S1 b3 ~4.     1010g离心4min，用包含PS的PBS洗2次。, ~3 n4 j, ]8 {. V9 ]6 {) s4 ~
5.     加培养基重悬，种到0.1%gelatin包被的48孔板上。" [" f, p7 W. h
重点是培养基！！！（纯技术交流，参考着看）

时一清

1、在无菌 250ml 离心瓶内加双抗 5ml,  4℃。
* X2 E0 H, |+ H( G4 B5 x2、中段尿液 150-500ml,  4℃。
6 `9 C. i" r8 b- e3、将尿液分装于 50ml 离心管中，400g 离心 10 min; 弃上清，底部预留约 2-3ml液体; 将上述尿液细胞液体合并为 1 管。 " d+ N. N; e# e! V4 z2 u
4、加入 PBS 至 50ml (双抗, 2x)，400 g 离心 10 min , 用 PBS 洗涤 1 次；用 3ml 尿液细胞培养基 (双抗)，重悬细胞接种于预先明胶铺被的 6 孔板。
& S) ^& G$ g1 _/ ~/ U5、静置 3 天后观察是否有尿液细胞克隆形成（克隆 3~6 天可形成，也可能超过 6天。克隆形成后 1 周~10 天可长满培养皿，根据细胞状态也可能需要更长时间）。当克 隆形成较多后，每两天更换培养基 1 次；根据实验需要培养、冻存及传代（0.25% 胰酶消化 2~3 分钟，37℃，加入饲养层细胞培养基终止消化）。 & Y! L. O6 x, V" ?9 T

时一清

健康人尿液中细胞很少~成功率不高

淘知路遥

正常尿液中经过尿道排出来带有各种菌，成功率低，何况是病人，特别是尿道感染的。

淘知路遥

医院有种方法可以暂时使保持私处保持干净无菌，然后再取尿液应该更好些

innatestem

回复 innatestem 的帖子# u% k5 o9 n8 V& l9 s
( f" [  V# f7 Z0 N- j! B4 {
你好。谢谢你的分享，培养基的成分有哪些？你能分享一下吗

innatestem

回复 时一清 的帖子$ R/ r% A: M) r' C' r
! \' r$ Q) u0 K) @& b+ C
你好。谢谢你的分享，培养基的成分有哪些？你能分享一下吗
, U9 }8 v3 N. t' p$ n( d+ A- P