急求如何从病人的尿液样本中分离，提取尿液上皮细胞的protocol

时一清

1、在无菌 250ml 离心瓶内加双抗 5ml,  4℃。 # c4 R; u' T, v- I) g0 _- \
2、中段尿液 150-500ml,  4℃。 8 t# @% x( h8 j* n: z/ ?- K' T5 ]0 R
3、将尿液分装于 50ml 离心管中，400g 离心 10 min; 弃上清，底部预留约 2-3ml液体; 将上述尿液细胞液体合并为 1 管。
' |5 M: d) h  Y$ B/ l2 ^4、加入 PBS 至 50ml (双抗, 2x)，400 g 离心 10 min , 用 PBS 洗涤 1 次；用 3ml 尿液细胞培养基 (双抗)，重悬细胞接种于预先明胶铺被的 6 孔板。 . _: H' i% p" V# r
5、静置 3 天后观察是否有尿液细胞克隆形成（克隆 3~6 天可形成，也可能超过 6天。克隆形成后 1 周~10 天可长满培养皿，根据细胞状态也可能需要更长时间）。当克 隆形成较多后，每两天更换培养基 1 次；根据实验需要培养、冻存及传代（0.25% 胰酶消化 2~3 分钟，37℃，加入饲养层细胞培养基终止消化）。   q1 E7 X: q6 c3 M: n( X, ?

时一清

健康人尿液中细胞很少~成功率不高

时一清

Primary Medium： 5ml FBS，250μl P-S，100μl amphotericin B，REGM SingleQuot kit 每管 50μl，再 加入 DMEM/high glucose 和 Ham’s F12 nutrient 等量混合液加至总 50μl。 注：Store the medium in the dark at 4 °C and use it within 2 weeks.
2 Z' }9 z* T3 Y9 e4 V0 y1 }, RRE Proliferation Medium： 50ml REBM 培养基中加入 REGM SingleQuot kit 每管 50μl。
0 ^/ S% g3 X% g7 ^$ F注：Store the medium in the dark at 4 °C and use it within 2 weeks.
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建议你仔细看一下) H3 l8 w% N; s8 E1 p
Generation of human induced pluripotent stem cells from urine samples.