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免疫细胞分离的几种方法 [复制链接]

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发表于 2017-3-20 15:47 |显示全部帖子 |倒序浏览 |打印
表面标记分子法+ ]) R' P- ^7 \& R/ A; L
E-花环沉降法) I6 f+ h1 Z% \
人类T细胞表面有SRBC受体绵羊红细胞受体,能够与多个SRBC结合,形状如花环;+ i5 R! p, d" ^) ?; j4 S* I" V  ]
亲和淘洗法) ^3 C( j- _; [4 L# p3 E" B. M! V
特异性单克隆抗体包被在聚苯乙烯培养皿/板表面,吸附具有相应表面分子的目标细胞,如抗Ig抗体吸附B细胞、抗CD3抗体吸附成熟T细胞,这些都属于正选分离
9 }* E4 v# N4 H细胞毒法
' p, }' E4 H, Y补体介导的特异性细胞毒分离法,在抗体的作用下裂解能与抗体结合的细胞,从而分离出不能与此抗体结合的细胞群,属于负选方法  v2 C, N0 }. T7 U( R6 |1 d
荧光激活细胞分离法
; A2 B) R8 d- }, \最有效法,目标细胞经荧光素标记单抗结合后,在激发光照射下会产生荧光,由FASC分选功能分选出来( ~* M  a) N/ o& _& A0 }
免疫磁珠分离法
$ T) ~) `3 f, p% {2 U# G3 b在磁珠表面包被特异型抗体,与目标细胞表面的抗原结合而与特定细胞粘附,再用磁珠分离2 M  k; M* ?, ^
) A% L8 c4 j4 ^3 k; W% E
对低渗的敏感性8 d5 m# o+ i1 W2 M
红细胞对低渗的敏感性要高于白细胞,例如红细胞裂解液' ~* b* U) L& Y2 O. f

& B0 m" I7 {1 Z9 }8 ]0 A  i: z1 h相对密度差异
, ]* i- a1 T8 @) [* Y聚蔗糖-泛影葡胺密度梯度离心法即FICOLL
. e$ e" w# a3 R/ A! Y2 }5 e+ b6 |红细胞和粒细胞相对密度大于ficoll,沉底;血浆密度最低位于最顶端;分层液位于中间,PBMC位于血浆和分层液的白膜层处
3 t2 H/ r! S. t2 g9 S) LPERCOLL密度梯度离心法" E& m/ m! k/ i) z: E5 S
最上层是死细胞残片和血小板,然后是单核细胞层,然后是淋巴细胞层,最后是粒细胞和红细胞2 w8 p, }1 g7 G* Y9 ?

0 I. ]" T5 t  [  b, u黏附和吞噬能力" w$ I! b" Y0 p2 W' X8 Z1 P
单核和巨噬细胞具有较强的粘附能力,加入细微的羟基铁颗粒或乳胶颗粒,待单核和巨噬细胞充分吞噬后,用密度梯度离心或者磁场吸附去除,利用尼龙毛柱分离B细胞。
6 }6 U" S. J5 A) b$ t) z% R) Q: Z2 u* i' t  j$ R
特异性促生长因子
9 \5 x$ N2 w. S3 N利用不同种类的免疫细胞需要的生长因子不同进行促进生长
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