免疫细胞分离的几种方法

shy-shen

表面标记分子法
& E# {# ?# ?+ e- y1 gE-花环沉降法' k" {2 e3 S9 J/ F3 q) Y
人类T细胞表面有SRBC受体绵羊红细胞受体，能够与多个SRBC结合，形状如花环；( X4 b+ j: H# \" ]8 F
亲和淘洗法
2 ]! {. L" T' ?* b特异性单克隆抗体包被在聚苯乙烯培养皿/板表面，吸附具有相应表面分子的目标细胞，如抗Ig抗体吸附B细胞、抗CD3抗体吸附成熟T细胞，这些都属于正选分离
- C; v8 b, y8 F" z. G  M9 B细胞毒法
4 {9 j# Y2 t1 y% O补体介导的特异性细胞毒分离法，在抗体的作用下裂解能与抗体结合的细胞，从而分离出不能与此抗体结合的细胞群，属于负选方法
$ m" M5 X9 @$ `4 I1 f荧光激活细胞分离法- E. ~' r/ K! D0 V( o
最有效法，目标细胞经荧光素标记单抗结合后，在激发光照射下会产生荧光，由FASC分选功能分选出来
. E( V, x1 ^  X' H) s免疫磁珠分离法
5 o: p( p# x: f( X$ Q, o. _在磁珠表面包被特异型抗体，与目标细胞表面的抗原结合而与特定细胞粘附，再用磁珠分离+ S/ X- b9 h* G! u  Z: Y1 x/ ~
- k' ]! D/ T, `9 q+ _; M  U/ g
对低渗的敏感性
9 R7 y+ D$ D1 G0 M* }/ x& S# E红细胞对低渗的敏感性要高于白细胞，例如红细胞裂解液! D0 l1 X6 w. F0 }, _' b
+ e0 _8 C5 o6 {- O/ N. F/ @3 y: v
相对密度差异) S& U* Y3 t4 l9 z% |$ y
聚蔗糖-泛影葡胺密度梯度离心法即FICOLL, b* T9 V( Y) Z" i7 D' {/ b
红细胞和粒细胞相对密度大于ficoll，沉底；血浆密度最低位于最顶端；分层液位于中间，PBMC位于血浆和分层液的白膜层处9 m* d  u9 U% m6 O* E: j# a
PERCOLL密度梯度离心法" A: w0 Z3 Y- b& r) U
最上层是死细胞残片和血小板，然后是单核细胞层，然后是淋巴细胞层，最后是粒细胞和红细胞' n2 `# `6 {, W& e  T- J) l* L6 e
' @' e$ }; X4 D: y! |& X: X
黏附和吞噬能力) T" f( N# C- [! C  U  Z6 E
单核和巨噬细胞具有较强的粘附能力，加入细微的羟基铁颗粒或乳胶颗粒，待单核和巨噬细胞充分吞噬后，用密度梯度离心或者磁场吸附去除，利用尼龙毛柱分离B细胞。
* Z, |6 M# X) J( N, m  \$ ?6 Z1 }  p/ n% e8 i) l! Q
特异性促生长因子
* s$ z4 Z( H; o$ L$ a9 G% j4 k) m利用不同种类的免疫细胞需要的生长因子不同进行促进生长